越橘种质资源的CDDP遗传多样性及聚类分析

• 作 者: 房文秀
• 机 构: 大连理工大学
• 出 处: 大连理工大学
• 发表日期: 2016年期
• 关键词: 越橘 CDDP标记 遗传多样性 聚类分析 品种鉴定

越橘(Vaccinium spp.)果实具有极高的营养价值和保健功效。我国越橘属野生资源丰富,引进栽培品种众多。但长期以来,我国越橘引进品种的真实遗传背景不甚明确,野生资源与引进栽培品种间的遗传多样性及亲缘关系尚不清楚,给越橘种质资源的收集、保护、利用及新品种的培育带来了诸多不利。利用分子标记方法对越橘种质进行遗传多样性及亲缘关系分析,对资源的保护、利用及种质创新具有重要的意义。本研究采用新型目的基因分子标记CDDP (conserved DNA-derived polymorphism)技术研究了我国野生笃斯越橘与31个引进栽培品种间的遗传多样性及亲缘关系,筛选并新开发了可用于越橘品种鉴别的CDDP引物。主要研究结果如下：1.采用单因素实验优化了CDDP-PCR反应体系：20μL体系中,模板浓度1.5 ng/μL,引物浓度0.4 pmol/μL,镁离子浓度1.5 nmol/μL,脱氧核苷酸浓度0.375 nmol/μL, Taq酶用量1.5 U。2.从已发表引物中筛选出在越橘中多态性高、扩增条带清晰易辨的17条引物。32份样品共检测到207条带,其中多态性条带188条,比例为90.82%,特异性条带17条,比例为8.21%。在种群水平上,平均有效等位基因数、Nei’s遗传多样性指数和Shannon信息指数分别为1.59、0.37、0.56。样本间的遗传相似性系数范围在0.44-1.00之间,平均值为0.73。3.在相似系数为0.69时,32个越橘种质分成3类,野生品种笃斯越橘单独聚为一类,矮丛品种’Blomidon’和半高丛品种’Northblue’聚为一类,其余品种聚为一大类。CDDP标记在越橘中具有较高的多态性及特异性,与种质的需冷量、抗寒性及果实颜色具有一定的相关性。4.根据抗寒基因CBF及花青素合成相关基因保守序列开发出新CDDP引物。CBF基因的14条引物共扩增出165条带,其中多态性条带163条,比例为98.79%,特异性条带25条,比例为15.15%。花青素合成基因的22条引物共扩增出226条带,其中多态性条带206条,比例为91.15%,特异性条带16条,比例为7.08%。新CDDP引物多态性及特异性高于已发表的引物,用于越橘种质资源遗传多样性分析和品种鉴别具有更大优势。