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在真核细胞中,蛋白质的翻译后修饰对调控蛋白质的功能、活性以及定位等生理活动至关重要。蛋白乙酰化是最普遍的蛋白质的翻译后修饰之一,它能参与基因转录、蛋白质降解、细胞代谢以及细胞周期调控。此外,蛋白质的乙酰化修饰在多种疾病中扮演重要角色,例如癌症、帕金森、阿尔兹海默症(老年痴呆)。hPCAF(p300/CBP-associated factor)是一种组蛋白乙酰化转移酶;此外,它还是一种主要存在于细胞核内的转录辅因子。人源PCAF(hPCAF)包含一个能乙酰化组蛋白和非组蛋白的具有催化功能的HAT(组蛋白乙酰化转移酶)结构域,位于C端的Bromo结构域和具有泛素化连接酶活性的N端未定义的结构域。HAT和C端的Bromo的结构已被解析,但N末端的结构目前却是未知的。hPCAF的415-492区域含有几个自乙酰化位点和一段核定位信号,相关报道称自乙酰化可调控hPCAF的入核及增加其HAT的活性,然而其确切的分子机理尚未被阐明。为此,我们测定了 415-492区域与hPCAF的HAT结构域之间的关系。首先通过酶学动力学方法分别分析hPCAF的415-658(415-492区域+HAT区域)区域和hPCAF的HAT区域的乙酰化活性,发现415-492区域抑制了 HAT活性;通过分析hPCAF的415-658区域和HAT(493-658)区域的HSQC谱,发现415-492区域的存在能够稳定hPCAF HAT的正常溶液构象,从以上结果分析得到:415-492区域和HAT区域可能存在一定的关系。为阐明这两个区域之间的关系,我们通过突变影响HAT催化活性关键位点E570、插入P3C酶切位点来获得乙酰化和非乙酰化的415-492区域。通过GST pull-down方法分析hPCAF的HAT分别与乙酰化和非乙酰化的415-492区域之间的相互作用,结果发现它们没有明显的相互作用;通过体外乙酰化反应分析发现,非乙酰化的415-492区域不能被单独的HAT乙酰化,以上结果说明hPCAF的415-492区域与HAT区域存在分子内的联系。此外,通过GST pull-down方法分析发现hPCAF自乙醜化不会影响其与入核受体importin α蛋白的结合,但通过比较乙酰化和非乙酰化的hPCAF 415-492区域的HSQC谱,发现自乙酰化影响hPCAF 415-492的局部构象,因此我们推测hPCAF的自乙酰化可能是间接地调控其入核。为更加精确地阐明hPCAF415-492区域和HAT区域的关系,我们分别对hPCAF 415-658乙酰化和非乙酰化两种蛋白进行晶体筛选,并得到较高分辨率的晶体。但由于415-492区域过于柔性,在晶体电子云密度图中未能找到其电子云密度,目前还无法解析hPCAF415-658 的结构。