家蝇幼虫凝集素的分离纯化及其抑制MCF-7细胞活性的研究

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家蝇幼虫血淋巴粗提液经过亲和层析,分离出3种与D-半乳糖特异性结合的蛋白,经高效液相色谱和聚丙烯酰胺凝胶电泳,分离出分子质量为38 ku的家蝇幼虫凝集素(MLL-2),该组分具有明显的凝血活性,并且MLL-2是一种热敏感型凝集素。圆二CD色谱结果表明,MLL-2的二级结构主要是以β折叠和无规卷曲的构象存在。MTT实验结果显示,MLL-2对人乳腺癌MCF-7细胞的生长具有明显的抑制作用,其抑制效果具有时间和浓度依赖性。通过HE染色、Hochest33258染色和吖啶橙染色从形态学上表明,MLL-2处理过的人乳腺癌MCF-7细胞出现凋亡小体、染色质浓缩等典型的凋亡现象。MLL-2处理过的人乳腺癌MCF-7细胞经TNUEL检测出DNA链断裂,证明发生凋亡现象。经流式细胞仪分析人乳腺癌MCF-7细胞被阻遏在G2/M期,并且凋亡细胞随作用时间的延长而增加。在人乳腺癌MCF-7细胞凋亡过程中,作为线粒体途径信使的Ca2+明显增加,并且线粒体途径上游的p53蛋白、中游的Bcl-2/Bad也发生改变,抑癌基因Bad升高,原癌基因Bcl-2略有降低。而且与对照组比较,线粒体途径下游的Caspase-3酶活性表达率明显增加(P<0.01)。因此,MLL-2通过诱导人乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡,从而起到抑制肿瘤细胞生长的作用,并且线粒体途径是诱导其发生凋亡的主要途径之一。
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