格纹鹅膏菌丝体的优化培养及与滇青冈室内共生研究

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鹅膏菌属(Amanita),隶属于蘑菇目(Agaricales)鹅膏科(Amanitaceae),为世界广布大属。该属大部分种含有剧毒物质,蘑菇中毒事件多数由它引起。鹅膏菌中毒素主要为α-鹅膏毒碱(α-amanitin),因其具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、镇静和麻醉等功效,在开发新特效药方面具有潜在应用。鹅膏菌属于外生菌根菌,与高等植物形成共生关系,加之野生资源极其有限,目前尚不能人工栽培及可持续开发利用。鹅膏菌的人工培养研究对于解决鹅膏的资源及利用等意义重大。  格纹鹅膏(Amanita fritillaria)为鹅膏中的一个广布种,具有典型性。本论文以采自云南省武定狮子山的格纹鹅膏为研究对象,对其菌丝体诱导和鉴定、培养基优化、与滇青冈(Cyclobalanopsis glaucoides)室内共生等方面进行了研究,主要结果如下:  1.用CTAB法分别提取子实体和菌丝体基因组DNA,用引物ITS4、ITS5对二者进行PCR扩增及测序,结果表明,二者的ITS序列长度均为602bp,且核苷酸序列完全相同,说明分离到的菌丝体来源于格纹鹅膏子实体。  2.从pH值、碳源、氮源、C/N比、ZnSO4浓度、外源激素种类及浓度等方面对培养基进行了优化。结果表明,适宜的pH为5.5-6.0;碳源为1.5%葡萄糖;氮源为0.13%的酵母膏;C/N比为20∶1;ZnSO4浓度为0.04-0.08%;1.0ppm ZT、0.3ppm NAA、0.5ppm IAA、0.5ppmKT对菌丝体生长皆具有一定的促进作用,其中ZT相对较好。  3.将生境中采集来的石灰菌(Lactarius piperatus)、腐殖土、植被叶子和根进行粉碎,通过三种方式(直接添加、或经水、乙醇提取物)添加入培养基。结果表明,添加乙醇提取物菌丝体生长受到明显的抑制;而直接添加10%的土壤、10%的叶子、或加入10ml的石灰菌水提液、10ml土水提液、10%的根水提液皆可促进菌丝生长。综上,优化培养基为:马铃薯200g/L、葡萄糖1.5g/L、酵母膏1.38g/L、ZnSO40.6g/L、MgSO41.0g/L、KH2PO40.5g/L、CaCl21.0g/L、ZT1.0ppm、琼脂粉10 g/L、粉碎腐殖土100g/L、根提液100g/L、石灰菌水提液50ml/L。  4.利用野外采集的滇青冈种子获得了无菌苗和盆栽小苗;利用无菌苗的茎段诱导出了愈伤组织;在共培养基上(真菌培养基与植物培养基1∶1混合)接种愈伤组织和菌丝体,菌丝体生长较快;将菌丝体接种盆栽小苗根部后,比起未接种的小苗,小苗生长旺盛,苗高度和过氧化物酶活力显著提高。
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