【摘 要】
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在对于新基因结构和功能的研究中,分析基因的表达调控已经成为不可忽略的内容.新基因OPB7-1已通过RACE技术和全长cDNA文库数据库检索确定了转录起始位点,我们采用生物信息学
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在对于新基因结构和功能的研究中,分析基因的表达调控已经成为不可忽略的内容.新基因OPB7-1已通过RACE技术和全长cDNA文库数据库检索确定了转录起始位点,我们采用生物信息学软件预测OPB7-1基因5′调控区的顺式作用元件,使用pGL3萤火虫荧光素酶报告基因载体构建重组体,结合哺乳动物细胞瞬时转染分析,在表达调控水平研究OPB7-1基因启动子区的顺式作用元件,并用电泳迁移率变动分析和蛋白-DNA交联实验确定关键的调控因子.生物信息学软件分析发现OPB7-1转录起始位点上游2kb的范围内有较多的调控元件,但主要特点是在转录起始位点上游有1个不典型TATA box(-45 bp~-48bp),3个不典型的CAAT box(-124 bp~-127 bp,-185 bp~-188 bp,~275 bp~-278bp)和7个相距较近的GC box(-587 bp~-592p,-948 bp~-954 bp,-1 093 bp~-1099 bp,-1 293 bp~-1 299 bp,-1 470 bp~-1 475 bp,-1 709 bp~-1 714 bp,-1 736bp~-1 743 bp).通过瞬时转染的功能分析,我们发现OPB7-1以转录起始调控为主,7个GC box和转录起始位点上游的第三个CAAT box(-275 bp~-278 bp)分别可以使转录活性增加到基础转录活性的24倍和112倍.电泳迁移率变动分析的实验结果显示OPB7-1基因调控序列可以特异的结合转录因子,并且SP1可能是其中的一个特异DNA结合蛋白,而进一步的蛋白-DNA交联实验证明SP1可以与OPB7-1基因假定调控序列特异的结合.
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