【摘 要】
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关于PKB在细胞周期进程中调控作用的研究很少,对受精卵的早期发育调控更很少有报道.该实验研究了PKB在小鼠1-细胞期受精卵中的活性、表达及mRNA水平变化并利用LY294002,PKB的
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关于PKB在细胞周期进程中调控作用的研究很少,对受精卵的早期发育调控更很少有报道.该实验研究了PKB在小鼠1-细胞期受精卵中的活性、表达及mRNA水平变化并利用LY294002,PKB的抑制剂,及硫代修饰PKB的反意义寡聚核苷酸(sulfurated antisense oligodeoxynucleotide,SAODN)、硫代修饰有意义寡核苷酸(sulfurated sense oligodeoxynucleotide,SODN)处理1-细胞期受精卵,观察受精卵细胞的分裂情况,从而研究PKB对小鼠1-细胞期受精卵早期发育的影响作用该实验应用cdc2和cdc25c特异磷酸化位点的抗体检测上述处理组中cdc25c和cdc2活性状态变化,进一步观察PKB信号转导通路对小鼠1-细胞期受精卵早期发育的调控作用,尤其是G2/M期过程中对cdc25和MPF的调控作用.结论:1.PKB存在于小鼠MⅡ卵母细胞和1-细胞期受精卵中.2.小鼠1-细胞期受精卵中PKB的比活性比MⅡ卵母细胞中升高1倍.3.小鼠1-细胞期受精卵中PKB的表达对比MⅡ卵母细胞明显增强.4.小鼠1-细胞期受精卵G2期可以检测到PKB的mRNA,而MⅡ卵母细胞中没有检测到PKB的mRNA.5.10μmol/L LY294002对小鼠1-细胞期受精卵分裂有完全抑制作用.6.1mg/ml的PKB的反意义脱氧寡聚核苷酸链对小鼠1-细胞期受精卵分裂有抑制作用.7.10μmol/L LY294002对小鼠1-细胞期受精卵G2/M期的MPF活性有抑制作用.8.1mg/ml的PKB的反意义寡聚核苷酸链对小鼠1-细胞期受精卵G2/M期MPF活性有抑制作用.9.10μmol/L LY294002和1mg/ml PKB的反义寡核苷酸链处理小鼠1-细胞期受精卵后,cdc25C的Srt216位磷酸化受抑制,cdc2的Tyr15处于磷酸化状态,MPF活性下降.
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