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本文主要从以下几个部分展开:
第一部分 NZBWFl/J鼠骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞亚群平衡的免疫调节
目的: 探讨狼疮鼠(NZBWF1/J)及正常鼠(BALB/c)骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外对T淋巴细胞免疫调节作用的异同。
方法: 采用直接贴壁法分离培养扩增MSCs,流式细胞术检测细胞表面标记物进行MSCs鉴定。经尼龙毛柱分选BALB/c鼠CD3+T淋巴细胞,经佛波酯(PMA)刺激,与正常及狼疮鼠MSCs共培养24小时后,流式细胞术检测共培养前后T细胞的凋亡及CD3+T细胞内细胞因子(IFN—γ、IL—4、IL-12、IL—6)的变化,RT—PCR技术测定转录因子T—bet和GATA-3。
结果:NZBWF1/J MSCs生长增殖速度较正常鼠快,而传代时间更短;对T细胞内细胞因子的影响,与NZBWF1/J MSCs共培养后,TH2型细胞因子IL—4、IL—6较共培养前增加(P<0.05),TH1型细胞因子IFN—γ、IL-12无明显变化,而与BALB/c MSC共培养后,IL—4降低,IFN—γ、IL-12增加(P<0.05);与正常及狼疮鼠MSCs共孵育后T细胞凋亡数目均降低(P<0.05)。
结论: MSCs可能通过诱导T细胞亚群的改变来影响狼疮病情进展,正常鼠MSCs对SLE病情可能有改善作用,狼疮鼠MSCs与正常鼠相比,免疫调节功能存在缺陷。
第二部分 MRL/lpr鼠骨髓间充质干细胞对T细胞作用的研究
目的: 探讨狼疮鼠(MRL/1pr)及正常鼠(C57BL/6)骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外生物学特性、对T淋巴细胞免疫调节作用的影响。
方法: 采用直接贴壁法分离培养扩增两种鼠系骨髓MSCs,流式细胞术鉴定MSCs表面标记物,观察MSCs生长状况并绘制生长曲线;取C57BL/6鼠脾脏细胞,经尼龙毛柱分选CD3+T淋巴细胞,经刀豆蛋白A(ConA)刺激,取正常及狼疮鼠MSCs或MSCs培养上清与T细胞共培养72h,然后CFSE染色测定T细胞增殖,流式细胞术检测共培养前后T细胞活化及T细胞的凋亡率。
结果: 第2代(P2)代后狼疮MSCs生长增殖快于正常MSCs;与正常及狼疮鼠MSCs共培养均可抑制正常鼠T细胞的增殖(P<0.05),与MSCs上清共培养对正常鼠T细胞增殖无抑制作用(P>0.05);与两种MSCs或上清共培养均可降低正常T细胞的活化(P<0.05)及凋亡率(P<0.05)。对正常T细胞增殖、活化、凋亡的影响,狼疮MSCs与正常MSCs间差异无统计学意义(P>0.05)。
结论: 狼疮鼠MSCs在体外生长上存在异常,但对T细胞增殖、活化、凋亡免疫调节无异常。
第三部分 间质干细胞的免疫调节及免疫治疗作用研究进展
自身免疫性疾病存在着明显的性别差异,其确切机理仍不十分清楚。目前许多人认为雄激素的保护作用造成了这种性别差异。雄激素通过直接作用于胸腺或者淋巴细胞,对细胞免疫和体液免疫都有明显的抑制作用,从而改变机体的免疫系统。