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草莓(Fragaria ananassa Duch)属于蔷薇科(Rosaceae)多年生草本植物。其果实营养丰富,鲜美多汁,具有很高的营养价值和经济价值。但草莓不耐贮运,草莓果实采摘后的贮运保鲜仍是目前生产实践中亟待解决的一大难题。另外,在草莓生产中多采用无性繁殖,经多年栽培后,很容易感染多种病毒,致使种性严重退化、产量降低、品质变劣和抗性降低等。因此,如何改善草莓品质和提高其抗病性已越来越受到人们的关注。近年来飞速发展的现代生物技术为草莓品种遗传改良提供了新途径。 本研究以目前国内主栽品种丰香和章姬为试材,较为系统地研究了影响草莓离体再生的诸多因素,如外植体类型、外源激素种类、外植体生理状态等,建立了草莓叶片高效离体再生体系,从而为草莓的遗传转化研究与应用奠定了基础。试验结果表明:不同激素组合及配比对草莓叶盘不定芽再生有不同的影响。TDZ对芽再生的效果明显比6-BA强,丰香叶盘在MS+TDZ2.0mg/L+2,4-D0.1mg/L+IBA0.2mg/L分化培养基上芽再生频率可达83.2%,平均每叶盘再生芽数达1.4个;章姬则在MS+TDZ4.0mg/L+NAA0.1mg/L+IBA0.2mg/L分化培养基上芽再生频率可达65.7%,平均每叶盘再生芽数为1.3个。同一基因型草莓叶盘再生效果比叶柄好,而其中又以10d左右叶龄的叶片再生能力最高。8.0mg/L AgNO3能较好地控制外植体的褐化,促进芽的分化。再生芽在1/2MS+IBA0.1mg/L生根培养基中,生根率达100%。本文还对草莓花药离体培养进行了研究,筛选出适合草莓赵屯一号品种花药培养最佳诱导愈伤组织培养基,即F+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+CH300mg/L,并成功诱导出再生芽获得再生植株。这为草莓花药脱毒培养和将来利用花药进行目的基因遗传转化研究提供了理论依据。 为了研究β-1,4-葡聚糖酶基因在草莓果实成熟过程中的作用及探讨利用β-1,4-葡聚糖酶反义基因培育耐贮草莓新品种,从草莓果实中提取总RNA,根据Gen Bank中β-1,4-葡聚糖酶基因FaEG1和FaEG3序列设计合成特异性引物,利用RT一PcR技术分别扩增了两个基因1 491bp和1863bp的cDNA,反向插入到植物表达载体PROKZ中,将该载体转入农杆菌AGL一I中,构建了石hEGI和卢h百G了的反义基因的表达载体。通过农杆菌介导法转化草墓品种丰香和章姬后,从104块抗卡那霉素转化愈伤中随机抽取24块经PCR检测,其中17块扩增出目的带,PCR阳性率为70.8%,初步证实这两个基因整合到草葛染色体基因组中,抗Kan愈伤现已分化形成12个转化芽。试验通过对农杆菌转化前外植体预培养、农杆菌侵染时间及转化后外植体共培养等方面的探索发现,农杆菌介导的草荀基因遗传转化的最佳条件为:预培养1d一共培养3d,农杆菌侵染时间为巧一ZOmin效果最好。