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研究背景与目的本课题研究了胆囊癌患者肿瘤组织中间皮素蛋白表达量与临床病理资料与预后的关系。并通过构建间皮素的慢病毒敲减载体，研究了间皮素基因静默后胆囊癌细胞增殖转移能力的变化。最后还以间皮素单抗作为靶向分子，合成了靶向胆囊癌的纳米MRI造影探针。并在体外初步验证了其识别胆囊癌细胞的能力。方法1.验证胆囊癌患者中间皮素表达水平与临床病理资料以及预后的相关性1）收集115名胆囊癌患者的临床病理资料，了解所有患者的预后情况；2）通过realtime-PCR和免疫组化检测胆囊癌组织中间皮素蛋白在胆囊癌组织中的表达水平；3）分析间皮素表达水平与胆囊癌患者临床病理资料与术后生存时间的关系。2.研究间皮素蛋白对胆囊癌细胞体外增殖及侵袭转移能力的影响1）根据间皮素基因信息合成siRNA序列，并插入到慢病毒质粒中，构建间皮素基因敲减载体，测序验证序列的正确插入，并测定慢病毒的滴度；2）利用western blot和realtime-PCR验证慢病毒对间皮素基因的敲减效果；3）采用MTT实验和克隆形成实验检测间皮素敲减对胆囊癌细胞增殖能力的影响，采用transwell小室实验和划痕愈合实验研究间皮素对癌细胞侵袭转移能力的作用；4）采用western blot验证间皮素敲减后侵袭转移相关蛋白的表达水平变化。3.制备靶向胆囊癌的磁性纳米探针用于MRI主动靶向造影1）用溶剂热法制备粒径为7nm的单分散纳米磁颗粒，并用DSL、TEM、VSM验证其表征，并用MTT测定其细胞毒性；2）用聚乙二醇（PEG）对材料进行表面修饰，将间皮素单抗偶联于磁颗粒表面的羧基；3）将靶向纳米探针与胆囊癌细胞共培养后测定细胞内的铁含量，并对细胞悬液进行MR扫描成像。结果间皮素在胆囊癌组织中的含量明显高于正常组织，且其表达水平与胆囊癌组织分化程度负相关，同时也与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移情况以及TNM分期有关。预后分析提示间皮素的高表达是胆囊癌患者预后不佳的独立危险因素。间皮素敲减后胆囊癌细胞的增殖能力及侵袭转移能力显著下降，而上皮间质转化（EMT）和MMP-9的分泌可能是间皮素促进肿瘤转移的基础。以间皮素单抗为靶向分子的纳米磁性探针具有较好的稳定性和较低的细胞毒性，能在体外有效地识别胆囊癌细胞并且增强癌细胞悬液的MRI扫描信号，具备了应用于早期胆囊癌分子靶向显影的潜力。结论：间皮素是评价胆囊癌患者预后的重要指标，它能影响胆囊癌细胞的增殖及转移能力，以间皮素为靶向分子的磁性纳米颗粒可成为胆囊癌诊断的新型MRI靶向造影剂