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【目的】
分析肝癌组织及配对癌旁组织中肌氨酸脱氢酶(Sarcosine dehydrogenase, SARDH)的表达情况。在细胞水平构建稳定过表达SARDH的HepG2肝癌细胞，分析过表达SARDH对肝癌细胞侵袭、转移的影响，明确SARDH能否通过影响肝癌细胞的侵袭及转移，从而参与肝癌的发生发展。分析SARDH的催化底物肌氨酸对肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)的临床诊断价值，为临床寻找潜在的、新的HCC诊断标志物奠定基础。
【方法】
收集41例在本院经病理确诊为HCC的患者癌组织和配对癌旁组织，经RNA抽提、逆转录及实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)检测SARDHmRNA在HCC癌组织和癌旁组织中的表达情况。应用Westernblot方法检测SARDH蛋白在HCC患者癌组织和癌旁组织中的表达情况。
构建稳定过表达SARDH的慢病毒载体及对照空载慢病毒载体(均携带GFP绿色荧光蛋白)，分别感染HepG2肝癌细胞后，获得稳定过表达SARDH的肝癌细胞株和对照细胞株，荧光显微镜观察感染效率，qRT-PCR验证过表达效率。通过划痕愈合实验、Transwell小室迁移实验检测SARDH对肝癌细胞迁移能力的影响。通过Boyden小室侵袭实验检测SARDH对肝癌细胞侵袭能力的影响。
收集77例HCC患者和42例肝炎、48例肝硬化、61例健康成人的血清标本及相应的临床资料(包括性别、年龄、AFP水平、ALT、AST、GGT、TBIL、IBIL、DBIL及HDL、LDL、CHOL、TG等指标)，用ELISA方法检测血清中肌氨酸的含量，绘制受试者工作特征曲线(Receiver Operating Characteristic, ROC)曲线，通过曲线下面积(Area under curve,AUC)评估肌氨酸能否作为HCC的有效诊断标志物，并且分析血清中肌氨酸含量与生化指标之间的相关性。
【结果】
对41例的HCC患者癌组织及配对癌旁组织的qRT-PCR结果显示HCC患者癌组织中SARDHmRNA的表达量明显低于癌旁组织(P<0.01)。对8组HCC癌组织和配对癌旁组织进行Westernblot的结果显示，SARDH蛋白质在HCC癌组织中的表达低于癌旁组织。
通过对比荧光镜下与白光镜下结果显示，稳定过表达SARDH的HepG2细胞及对照细胞大部分均表达GFP绿色荧光蛋白，说明感染效率高。qRT-PCR实验结果表明，过表达组细胞SARDHmRNA的表达水平明显高于空载对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。划痕愈合实验、Transwell小室迁移实验结果显示过表达SARDH肝癌细胞系的迁移能力明显低于对照组(P<0.05)。Boyden小室侵袭实验结果显示，过表达SARDH的肝癌细胞系的侵袭能力低于对照细胞系，差异具有统计学意义(P<0.05)。
ELISA结果显示，HCC组、肝炎组、肝硬化组血清肌氨酸浓度相对于健康对照组均明显升高，组间差异具有统计学意义(P<0.05)。HCC患者血清肌氨酸水平与肿瘤体积>3cm及AFP>20ng/ml这2个病理特征具有明显的相关性(P<0.05)，而与生化指标中的AFP(r=0.649)、AST(r=0.296)、CHOL(r=0.264)、VLDL(r=0.261)、TG(r=0.247)、GGT(r=0.236)具有明显的相关性(P<0.05)。ROC曲线显示，相对于健康对照组，肌氨酸诊断HCC的AUC为0.762，而相对于所有对照组，肌氨酸诊断HCC的AUC为0.625。
【结论】
在肝癌患者体内，SARDHmRNA及蛋白在癌组织中的表达低于癌旁组织。SARDH能够抑制体外肝癌细胞的迁移及侵袭。血清肌氨酸水平对HCC的筛查和诊断具有一定的价值。
分析肝癌组织及配对癌旁组织中肌氨酸脱氢酶(Sarcosine dehydrogenase, SARDH)的表达情况。在细胞水平构建稳定过表达SARDH的HepG2肝癌细胞，分析过表达SARDH对肝癌细胞侵袭、转移的影响，明确SARDH能否通过影响肝癌细胞的侵袭及转移，从而参与肝癌的发生发展。分析SARDH的催化底物肌氨酸对肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)的临床诊断价值，为临床寻找潜在的、新的HCC诊断标志物奠定基础。
【方法】
收集41例在本院经病理确诊为HCC的患者癌组织和配对癌旁组织，经RNA抽提、逆转录及实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)检测SARDHmRNA在HCC癌组织和癌旁组织中的表达情况。应用Westernblot方法检测SARDH蛋白在HCC患者癌组织和癌旁组织中的表达情况。
构建稳定过表达SARDH的慢病毒载体及对照空载慢病毒载体(均携带GFP绿色荧光蛋白)，分别感染HepG2肝癌细胞后，获得稳定过表达SARDH的肝癌细胞株和对照细胞株，荧光显微镜观察感染效率，qRT-PCR验证过表达效率。通过划痕愈合实验、Transwell小室迁移实验检测SARDH对肝癌细胞迁移能力的影响。通过Boyden小室侵袭实验检测SARDH对肝癌细胞侵袭能力的影响。
收集77例HCC患者和42例肝炎、48例肝硬化、61例健康成人的血清标本及相应的临床资料(包括性别、年龄、AFP水平、ALT、AST、GGT、TBIL、IBIL、DBIL及HDL、LDL、CHOL、TG等指标)，用ELISA方法检测血清中肌氨酸的含量，绘制受试者工作特征曲线(Receiver Operating Characteristic, ROC)曲线，通过曲线下面积(Area under curve,AUC)评估肌氨酸能否作为HCC的有效诊断标志物，并且分析血清中肌氨酸含量与生化指标之间的相关性。
【结果】
对41例的HCC患者癌组织及配对癌旁组织的qRT-PCR结果显示HCC患者癌组织中SARDHmRNA的表达量明显低于癌旁组织(P<0.01)。对8组HCC癌组织和配对癌旁组织进行Westernblot的结果显示，SARDH蛋白质在HCC癌组织中的表达低于癌旁组织。
通过对比荧光镜下与白光镜下结果显示，稳定过表达SARDH的HepG2细胞及对照细胞大部分均表达GFP绿色荧光蛋白，说明感染效率高。qRT-PCR实验结果表明，过表达组细胞SARDHmRNA的表达水平明显高于空载对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。划痕愈合实验、Transwell小室迁移实验结果显示过表达SARDH肝癌细胞系的迁移能力明显低于对照组(P<0.05)。Boyden小室侵袭实验结果显示，过表达SARDH的肝癌细胞系的侵袭能力低于对照细胞系，差异具有统计学意义(P<0.05)。
ELISA结果显示，HCC组、肝炎组、肝硬化组血清肌氨酸浓度相对于健康对照组均明显升高，组间差异具有统计学意义(P<0.05)。HCC患者血清肌氨酸水平与肿瘤体积>3cm及AFP>20ng/ml这2个病理特征具有明显的相关性(P<0.05)，而与生化指标中的AFP(r=0.649)、AST(r=0.296)、CHOL(r=0.264)、VLDL(r=0.261)、TG(r=0.247)、GGT(r=0.236)具有明显的相关性(P<0.05)。ROC曲线显示，相对于健康对照组，肌氨酸诊断HCC的AUC为0.762，而相对于所有对照组，肌氨酸诊断HCC的AUC为0.625。
【结论】
在肝癌患者体内，SARDHmRNA及蛋白在癌组织中的表达低于癌旁组织。SARDH能够抑制体外肝癌细胞的迁移及侵袭。血清肌氨酸水平对HCC的筛查和诊断具有一定的价值。