水稻OsRUS6A基因克隆和功能的初步分析

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RUS(ROOT UV-B SENSITIVE)是包含DUF647的结构域,并与植物感受低强度UV-B有关的基因,广泛存在于拟南芥、水稻、苔藓、果蝇、人等的基因组中。在水稻的全基因组中,共有6个RUS基因,分别为OsRUS1(Os04g22360),OsRUS2(Os04g43690),OsRUS3(Os03g11500),OsRUS5(Os01g04860),OsRUS6A(Os01g66350)和OsRUS6B(Os05g34650),对它们的功能尚缺乏明确的认识。本实验以OsRUS6A为研究对象,通过构建干涉载体和启动子分析载体并获得转基因水稻株系,对转基因株系进行相关分析测试,实验获得了如下结果:  从美国密歇根大学水稻数据库(http://rice.plantbiology.msu.edu/)下载OsRUS6A(LOC_Os01g66350.1)基因全长序列,并据此设计引物,以位于OsRUS6A的ORF内从+965位至+1437位的片段构建RNAi干涉载体。随后采用农杆菌介导法侵染水稻中花11胚性愈伤组织,获得OsRUS6A表达下调的干涉株系,分别种植土壤后获得T1代的种子,将T1代种子在1/2NB培养基中无菌催芽,分别进行光照处理和暗处理,观察其表型变化,然后对所有植株进行PCR及潮霉素筛选,再对获得的阳性苗进行正常水培,测定不同时期的水稻SOD,POD,CAT等抗氧化酶的活性以及MDA的含量,并与野生型植株作比较。本实验还构建了OsRUS6A P::GUS和OsRUS2.2 P::GUS的启动子分析载体,通过对获得的阳性转基因株系的四叶期和抽穗灌浆期的组织进行GUS染色,观察其表达情况。  本实验发现:在光照下水稻OsRUS6A干涉植株的表型没有在拟南芥中明显,这可能与基因冗余和干涉程度有关;对抗氧化酶和MDA进行测定结果发现,OsRUS6A可能参与调控抗氧化酶的活性;OsRUS6A、OsRUS2.2在水稻根冠和分生区未见表达,但在伸长区和成熟区的维管束、叶脉、茎、维管素转换区和颖壳均有表达。
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