【摘 要】
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目的:椎间盘退变是引发一系列脊柱疾病的主要原因,随着全球人口老龄化规模日益扩大,脊柱退行性疾患发病率呈现逐年递增趋势,不但人类健康受到损害,而且给社会经济带来沉重负担。目前临床应用的手术及保守治疗方法侧重于减轻疾病症状,并不能从病因学角度进行预防或治疗,导致疾病反复发作。软骨终板是椎间盘重要组织结构,也是出现椎间盘退变现象的始动因素。本研究旨在筛选出符合条件的mi RNA,探讨mi RNA对软骨终
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目的:椎间盘退变是引发一系列脊柱疾病的主要原因,随着全球人口老龄化规模日益扩大,脊柱退行性疾患发病率呈现逐年递增趋势,不但人类健康受到损害,而且给社会经济带来沉重负担。目前临床应用的手术及保守治疗方法侧重于减轻疾病症状,并不能从病因学角度进行预防或治疗,导致疾病反复发作。软骨终板是椎间盘重要组织结构,也是出现椎间盘退变现象的始动因素。本研究旨在筛选出符合条件的mi RNA,探讨mi RNA对软骨终板细胞功能影响,同时明确mi RNA与HMGB1调控关联。本实验研究结果将对治疗或延缓椎间盘软骨终板退变提供重要理论依据。方法:利用Target Scan 7.1预测HMGB1上游调控mi RNA,小鼠软骨原代细胞系ATDC5通过低血清培养建立软骨终板退变细胞模型,倒置显微镜观察不同时期细胞形态。采用q RT-PCR检测软骨终板退变细胞模型相关指标,筛选目标mi RNA并对细胞转染效率进行评估。CCK8实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室实验检测细胞侵袭,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。QRT-PCR法和Western Blot法检测细胞自噬基因P62、Beclin1和细胞凋亡基因Bax、Bcl-2表达,并明确mi RNA和炎性基因HMGB1调控关系。通过SPSS20.0统计学软件对软骨终板正常细胞组与退变细胞组实验数据进行分析。结果:ATDC5诱导退变细胞组中,细胞形态在培养48h时呈细长状,检测结果显示MMP13、ADAMTS5、MMP3和Col-X表达水平较高,而SOX9及Ⅱ型胶原表达水平较低,表明构建软骨终板退变细胞模型完成。在退变细胞组中,mi R-142-3p表达水平较低,三次实验结果稳定。敲低mi R-142-3p表达会抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,改变细胞周期,降低细胞迁移和侵袭能力。还能抑制Bcl-2表达,促进Bax、P62、Beclin1表达。敲低mi R-142-3p还会对HMGB1表达产生促进作用,而过表达mi R-142-3p表达则有相反效果。结论:mi R-142-3p可以改变软骨终板退变细胞功能并造成椎间盘退变,HMGB1可能在这种关联中具有重要作用,这些结果将对研究软骨终板退变提供新思路。
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