论文部分内容阅读
为了解湖北地区禽流感(avian influenza,AI)和猪流感（swine influenza，SI）的流行情况，我们对2016年湖北地区养鸡场、养猪场开展病原的分离鉴定。对分离到的流感病毒进行全基因组序列的测定及遗传进化分析，并初步探究了猪流感病毒的生物学特性及其对小鼠的致病性。对中国猪流感的分布及遗传进化、流行情况做了初步的统计分析，为有效防控流感的暴发提供理论依据。本研究的主要内容如下: 1、禽流感病毒的分离鉴定、基因组测序及遗传进化分析 从鸡群中分离出2株禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)，对2株病毒用RT-PCR扩增基因组片段，病毒的HA、NA基因测序结果Blast分析发现2株病毒为H9N2亚型禽流感病毒。 构建了2株H9N2亚型禽流感病毒的HA、NA、PB2、PB1、PA、NP、M和NS基因的系统发育进化树，发现HA和NA基因属于Y280谱系，PB1、PA、NP和NS基因属于SHF98-1ike谱系，PB2和M基因属于G1-like谱系。2株病毒的HA裂解位点均为-RSSR↓GLF-，具有低致病性流感病毒的分子特征。2株病毒在HA蛋白上比当前流行株Y280多了一个潜在糖基化位点313(NCS)。2株病毒均产生了HA蛋白234位点从Q到L的突变，因此或许能够结合唾液酸α-2，6受体而具备感染哺乳动物的能力。2株病毒均产生了M2蛋白31位点从S到N的突变，因此可能能够抵抗金刚烷胺类离子通道阻断剂的作用。 2、猪流感病毒的分离鉴定、遗传进化分析及其对小鼠的致病性研究 从发病猪中分离出1株猪流感病毒(swine influenza virus，SIV)，命名为A/swine/Hubei/221/2016（简称为HuB EA-H1N1），RT-PCR扩增分离毒株的基因组片段，病毒HA、NA基因测序结果Blast分析发现病毒是H1N1亚型猪流感病毒。 构建1株H1N1亚型SIV的HA、NA、PB2、PB1、PA、NP、M和NS基因的系统发育进化树，HuB EA-H1N1与A/Hunan/42443/2015(简称为HuNEA-H1N1)的遗传距离较近。2株H1N1流感病毒均属于欧亚禽系H1N1流感病毒。HuB EA-H1N1与HuN EA-H1N1毒株的PB2、PB1、PA和NP基因来源于pandemic H1N1/2009，HuB EA-H1N1与HuN EA-H1N1毒株的HA、NA、M和NS基因来源于欧亚禽系流感病毒，因此H1N1猪流感分离株是一个重组型欧亚禽系猪流感病毒。 对中国猪流感的流行情况研究发现，中国的猪流感病毒以H1N1亚型为主，近年来中国主要流行欧亚禽系H1N1亚型SIV。欧亚禽系H1N1亚型SIV总共分为11个基因型，重组型欧亚禽系H1N1亚型SIV近年来出现的越来越多，特别是病毒聚合酶基因片段PB2、PB1、PA和NP来源于pandemic H1N1/2009病毒的重组株出现的越来越多。 HuB EA-H1N1与HuN EA-H1N1的基因组片段高度同源，因此在测定H1N1分离毒株HuB EA-H1N1的生物学特性及其对小鼠的致病性试验时将毒株A/Hunan/42443/2015作为对照。分离毒株A/swine/Hubei/221/2016较毒株A/Hunan/42443/2015在MDCK细胞、Nptr细胞、A549细胞上的增殖滴度略低。2株病毒对BALB/c小鼠的致病性试验显示，分离株A/swine/Hubei/221/2016对小鼠的致死率为25‰毒株A/Hunan/42443/2015对小鼠的致死率为100％。2株病毒均能引起不同程度的肺脏、气管和鼻甲的感染。 综上所述，本研究通过对鸡场和猪场流感病毒的分离和鉴定，开展了2株H9N2亚型AIV和1株H1N1亚型SIV基因组序列的遗传进化研究，对猪流感病毒分离株进行了致病性研究，并分析了中国猪流感病毒的流行情况。从分子水平掌握H9N2亚型AIV和H1N1亚型SIV的遗传特性和变异规律，为流感疫苗的筛选及流感的防制奠定了重要基础。