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研究背景与目的： 鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma,NPC）是来源于鼻咽上皮细胞的恶性肿瘤。每年世界上大约有80，000例新发病例和50，000例死亡病例，鼻咽癌发病具有明显种族和地域特征，在东南亚及我国东南沿海发生率较高。鼻咽癌是由不同病因构成的疾病，其中包括遗传、环境、EBV病毒感染等因素。鼻咽癌对化疗不敏感，对放疗较敏感，尤其调强放射治疗对鼻咽癌有显著疗效。目前鼻咽癌治疗失败的主要原因是肿瘤细胞的远处转移。因此，更深入的了解鼻咽癌发生发展尤其远处转移的机制，寻找新的生物标志物，可能会为鼻咽癌的治疗发展提供新的机遇。 人类长链非编码RNA（lncRNA）H19是一种父源印记基因，长约2.7Kb，位于11p15.5，包含四个内含子，转录长为2.3Kb的H19非编码RNA，其对哺乳动物的胚胎发育有重要作用。现有研究表明H19基因的突变与贝克威斯韦德曼氏征、Silver–Russell综合征、Wilms肿瘤形成有关。越来越多的证据表明H19在多种癌中发挥促癌作用，包括食管癌、胃癌、膀胱癌、胆囊癌、肝细胞癌、结肠癌和乳腺癌等。尽管研究表明H19基因在许多癌症中是一种重要的癌基因，但H19对于鼻咽癌的发生发展有何影响尚不清楚。本课题旨在探讨H19在鼻咽癌中的生物学功能及其作用机制，为鼻咽癌的治疗提供新的靶点。 研究方法： 1、对鼻咽活检组织（包括鼻咽癌组织和正常组织）及其鼻咽细胞进行RNA-Seq分析，找出涉及鼻咽癌致瘤的潜在lncRNAs。 2、采用qRT-PCR技术分别检测永生化鼻咽上皮细胞与鼻咽癌细胞株，和鼻咽非癌组织与鼻咽癌组织的H19的RNA水平。 3、在鼻咽癌细胞株中用针对H19特异性siRNA干扰H19表达和构建过表达H19的鼻咽癌稳株，研究H19对细胞功能的影响。用平板克隆形成实验、MTT实验、transwell迁移和侵袭实验观察H19对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 4、利用qRT-PCR技术和western blotting分别从mRNA水平和蛋白水平检测上皮间质转化（EMT）标志物的表达情况，研究H19对EMT的影响，同时用qRT-PCR技术检测金属蛋白酶家族（MMP）成员基因表达水平，寻找H19促进侵袭和转移的分子机制，这可能是解释鼻咽癌细胞迁移和侵袭的一条路径。 研究结果： 1、RNA-Seq结果表明，相对于正常组织和原代培养的正常鼻咽上皮细胞，鼻咽癌组织和鼻咽癌上皮细胞高表达H19。 2、扩大组织样本量验证H19在鼻咽癌组织及细胞株中表达上调，并且研究发现H19表达水平与鼻咽癌病人临床分期呈正相关(P=0.001)。 3、H19过表达促进鼻咽癌细胞增殖，增强其平板克隆形成、迁移和侵袭的能力；敲低H19明显抑制鼻咽癌细胞增殖，减弱其平板克隆形成、迁移和侵袭的能力。 4、在鼻咽癌细胞中H19过表达促进EMT进程，H19敲低显著抑制EMT进程。 5、在鼻咽癌细胞中H19表达与金属蛋白酶MMP家族部分成员表达有关。 研究结论： 本研究我们发现H19在鼻咽癌细胞及组织中表达上调，并且H19表达水平与鼻咽癌临床分期呈正相关，即分期越高，H19表达越高。我们研究发现H19能促进鼻咽癌细胞增殖、克隆形成和迁移的能力，从而促进鼻咽癌发生发展。此外，我们的研究结果表明过表达H19促进侵袭和转移是通过促进EMT而发生的，即上皮标志物E-cadherin表达减少，间质标志物Fibronectin、N-cadherin、Vimentin表达增加；相反，敲低H19抑制EMT，上皮标记物E-cadherin表达增加，间质标志物Fibronectin,、N-cadherin、Vimentin表达减少。进一步研究发现，H19表达与MMP家族成员尤其MMP-10表达水平密切相关。以上研究结果表明H19在鼻咽癌发生发展中扮演着重要角色，可能作为鼻咽癌治疗的一个潜在靶点。