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研究目的:牙周炎(Periodontitis)是威胁人类口腔健康的两大慢性疾病之一,是由病原体及其代谢产物,尤其是脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激引起的持续性炎症免疫反应,导致局部牙周支持组织破坏,是牙齿松动和脱落的一个主要原因。流行病学调查显示:在复杂多变的高原环境下,机体血液变得“黏、浓、聚、凝”,牙周组织中氧浓度急剧降低,氧化应激升高,龈下菌群种类更加丰富,其中G-厌氧菌大量繁殖,牙周组织微环境变化,对细菌及其代谢产物的抵抗力下降,牙周炎症加重。由此可见高原牙周病的发病机制具有一定的特殊性,其重要防治策略是抗炎和抗氧化。然而,目前尚没有针对高原牙周病的特异性治疗药物,牙周炎的治疗仍是基础治疗加药物治疗或牙周手术治疗等,不仅治疗周期长,预后不佳,并且人工合成的治疗药物大多具有潜在的不安全性,侵袭性治疗还会给患者造成心理上的阴影,因此非常有必要寻找一种安全有效的药物。近年来,红景天苷(Salidroside,SAL)受到越来越多学者的关注,它是从药用植物红景天中提取的一种主要活性成分,具有免疫调节、抗疲劳、抗抑郁、抗炎、抗氧化等多种作用。但是,SAL是否对高原牙周病有治疗作用目前还未见相关报道。为探讨SAL对高原牙周病的作用,本课题参照国内外研究,选用牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)LPS刺激人牙周膜细胞建立牙周炎细胞模型并在1%O2低氧环境下培养,检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和细胞内外的肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factoralpha,tnf-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,il-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6,il-6)、核转录因子-κb(nuclearfactor-kappab,nf-κb)及胞浆中抑制蛋白(inhibitorkappab,iκba)磷酸化的表达情况,初步探讨sal对低氧条件下lps诱导的人牙周膜细胞的保护作用及相关机制,为预防或治疗高原牙周病提供了新的思路。研究方法:1、改良酶消化组织块贴壁法原代培养人牙周膜细胞。2、用含sal终浓度为0、30、60、100ug/mlsal的dmem分别培养第5代人牙周膜细胞,并于培养后1、2、3、4、5、6d各时间点,采用mtt法检测各浓度组细胞的增殖活性。3、模型建立及实验分组:取第5代人牙周膜细胞并将其随机分为5组,分别用不含lps和sal的dmem(a组,对照组)以及含10ug/mllps+0ug/mlsal(b组,单纯lps组)、10ug/mllps+30ug/mlsal(c组)、10ug/mllps+60ug/mlsal(d组)、10ug/mllps+100ug/mlsal(e组)的dmem进行1%o2低氧连续培养6h后,收集各组细胞及其上清液,分别用2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐法(2,7-dichlorodihydrofluoresceindiacetate,dcfh-da)检测各组细胞中的ros表达水平、反转录酶-聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,rt-pcr)和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked-immunosorbentassays,elisa)检测各组细胞tnf-α、il-1β、il-6mrna和蛋白的表达水平、westernblot法检测a组、b组和10ug/mllps+100ug/mlsal细胞的转录因子-κb(nf-κb)信号通路的磷酸化情况。研究结果:1、采用改良酶消化组织块贴壁法,在体外能成功获得原代人牙周膜细胞。2、mtt实验结果显示:本实验最大剂量100ug/ml的sal不影响低氧条件下lps诱导的人牙周膜细胞的增殖活力(p(29)0.05)。3、dcfh-da实验结果显示:与对照组比较,单纯LPS组人牙周膜细胞内的ROS显著升高(P<0.05);与LPS组比较,3个SAL实验组人牙周膜细胞内ROS的表达降低(P<0.05),且具有剂量依赖性。4、RT-PCR和ELISA实验结果显示:和对照组比较,单纯LPS组人牙周膜细胞的TNF-α、IL-1β和IL-6在mRNA和蛋白质水平的表达显著升高(P<0.05);与单纯LPS组比较,3个SAL实验组TNF-α、IL-1β和IL-6在mRNA转录水平和蛋白质水平的表达降低(P<0.05),且具有剂量依赖性。5、Western blot实验结果显示:和对照组比较,单纯LPS组人牙周膜细胞的NF-κB和IκBa的磷酸化水平升高(P<0.05);与单纯LPS组比较,100ug/ml的SAL实验组的人牙周膜细胞的NF-κB和IκBa的磷酸化水平降低(P<0.05)。研究结论:1、本实验最大剂量100ug/ml的SAL不影响人牙周膜细胞的增殖,无毒副作用,是安全的。2、SAL可降低低氧条件下LPS诱导的人牙周膜细胞的ROS和TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子表达,具有一定的保护人牙周膜细胞的作用。这个保护机制可能是SAL抑制人牙周膜细胞NF-κB信号通路的磷酸化。3、SAL可作为高原牙周病的预防和治疗用药,为高原牙周病提供了一个新的治疗思路。