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马齿苋是药食两用植物,马齿苋多糖(Polysaccharide from Portulaca Oleracea L.,POP)是主要功能成分之一。关于马齿苋粗多糖的抗菌、抗病毒、抗氧化、抗癌、降血糖、改善胰岛素抵抗等功效已有不少研究报道。然而有关纯化马齿苋多糖调脂降糖作用的报道较少,尤其在细胞分子水平研究纯化马齿苋多糖调脂降糖机制方面。因此,本论文以3T3-L1前脂肪细胞和SD大鼠为研究对象,从整体动物和细胞分子水平研究纯化马齿苋多糖调脂降糖功效及改善胰岛素抵抗作用的分子机制,开展了以下几个方面的实验研究:一、马齿苋多糖对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响。分别用不同浓度(0.01-0.5mg/mL)的马齿苋多糖处理3T3-L1前脂肪细胞,在不同时间点(1、3、5d)采用MTT法、NRU法和LDH释放法测定细胞增殖率。结果显示,马齿苋多糖抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖活性呈现时间和浓度依存趋势;NRU法和LDH释放法测试也获得相似结果,但和MTT法测试结果相比,其敏感度约有差异。二、马齿苋多糖对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。用Ins、IBMX和地塞米松诱导3T3-L1前脂肪细胞为成熟脂肪细胞;采用油红O染色法定量观测细胞内脂肪沉积的水平,并用RT-PCR技术检测胰岛素信号通路相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-γ)、PKB/Akt、GLUT4的表达。结果表明,高浓度的马齿苋多糖通过促进胰岛素信号相关靶基因的表达而调控脂肪细胞分化。三、马齿苋多糖改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的研究。同上方法诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型后,采用葡萄糖氧化酶法测定细胞培养液中葡萄糖的含量,用RT-PCR技术检测细胞IR、IRS-1、PKB/Akt的基因表达。结果显示,马齿苋多糖通过促进IR、IRS-1和PKB/Akt的表达而促进葡萄糖吸收,从而改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗状态。四、马齿苋多糖调控Ⅱ型糖尿病脂质代谢的研究。用高糖高脂饲料和STZ(30mg/kg)诱导Ⅱ型糖尿病模型后,喂饲不同浓度的马齿苋多糖(25、50、100mg/mL)1周后,采取血和相关组织样本进行生理生化及分子靶的蛋白和基因表达分析。结果显示,马齿苋多糖的调脂降糖作用是通过调控PPAR-γ和IR的表达。