【摘 要】
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白血病(Leukemia)是一类常见的造血系统恶性疾病,很容易发生全身多脏器的转移和浸润,在我国有着很高的发病率和死亡率,严重危害人类的身体健康。目前白血病的治疗手段还是以
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白血病(Leukemia)是一类常见的造血系统恶性疾病,很容易发生全身多脏器的转移和浸润,在我国有着很高的发病率和死亡率,严重危害人类的身体健康。目前白血病的治疗手段还是以化疗和骨髓移植为主,但多数患者只能获得短暂的缓解,最终因复发或耐药而死亡。
掌叶半夏凝集素(Pinellia Pedatisecta Agglutinin,PPA)是存在于中草药掌叶半夏中的单子叶甘露糖型植物凝集素,能特异性识别并结合甘露糖。其特有的糖结合特性可能为分析各种肿瘤细胞表面糖链结构变化及对肿瘤恶化、迁移及预后等方面的研究提供有用的工具。
慢病毒载体因其独特的优势而成为继简单的逆转录病毒和腺病毒后较有前途的病毒载体。国内外已经对该类载体进行了一系列的从基础到临床的研究。目前为止,HIV-1型载体的实验中均尚未发现野生型病毒的产生,提示其安全性是有保证的。目前关于掌叶半夏蛋白抗肿瘤的研究都是作为外用药物,因此我们用慢病毒载体携带PPA基因导入白血病细胞,并且对PPA基因杀伤白血病细胞的能力进行了评估。
本课题成功构建了携带PPA基因的质粒pWPXL-PPA。采用第二代慢病毒载体系统,将载体质粒pWPXL-PPA与包装质粒pSPAX2及包膜质粒pMD2.G共转染293T细胞,成功包装出了携带PPA基因的目的慢病毒以及不带外源基因的对照慢病毒,分别将其命名为LV-PPA和LV。结果发现对照慢病毒能够高效率的感染多种人白血病细胞株及其它多种癌细胞株,表明该课题所包装出的慢病毒的广谱性和高效性;另外还发现慢病毒对K562/ADR细胞的感染效率比对K562细胞的感染效率明显要高(P＜0.05);通过Hoechst33342染色检测了目的慢病毒对K562细胞凋亡诱导的情况,发现感染目的病毒的细胞体积变小,细胞核致密固缩,出现凋亡小体,这表明了凋亡的发生。
总之,本课题构建的慢病毒表明了其确实是一类高效的基因转移载体,同时本课题的研究为PPA基因成为一种新的癌症治疗基因奠定了基础,也为白血病的治疗提供了新的思路。
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