【摘 要】
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Rd29A基因启动子是一个受干旱、高盐和低温等逆境诱导表达的特异性启动子,也是植物抗逆性基因工程中理想的逆境诱导型启动子。本研究的目的是从结缕草中分离出Rd29A基因启动
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Rd29A基因启动子是一个受干旱、高盐和低温等逆境诱导表达的特异性启动子,也是植物抗逆性基因工程中理想的逆境诱导型启动子。本研究的目的是从结缕草中分离出Rd29A基因启动子,并对其序列进行测序、比较和分析,鉴定该启动子的功能。筛选出适用于草坪草转基因的诱导型启动子,促进草坪草转基因技术的发展,对于逆境条件下结缕草的生长发育有重要意义。根据文献上发表的Rd29A基因启动子序列设计并合成了特异引物,以我国野生的结缕草为实验材料,通过PCR方法从该结缕草样品基因组DNA中扩增到目的片断,并进行了测序、比较和分析,与GenBank报道的Rd29A基因启动子序列相比较,同源性为41.65%。该序列在GenBank上的登录号是:EU346948。利用GFP和GUS基因作为报告基因,构建了用于比较鉴定所克隆启动子活性pBIG(35S-GFP)、pBIRG (Rd29A-GFP)和pBI(35S-GUS)、pBIR (Rd29A-GUS)四个植物真核表达载体,采用基因枪法对洋葱表皮细胞进行遗传转化。在胁迫诱导后,检测目的片段在受体细胞中调控基因表达的活性,从而鉴定其功能。结果表明克隆到的目的片段具有启动子功能,并且在干旱、高盐、低温诱导胁迫下更能强烈地驱动下游基因的表达。
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