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动物疾病模型，是指运用人为的方法，使动物处在一定的物理的、化学的、生物的致病因素下，诱发动物全身、器官或组织出现一定程度的损害，进而表现出某种类似人类疾病的症状，利用这种方法来研究某些人类疾病的发生规律及机理，从而为研究人类疾病的预防、治疗奠定基础。猪的心血管系统以及代谢系统等都与人的情况极其相似，而且其体型大小更适合进行手术操作。另外，它一窝产仔多、生长繁殖周期短、生产力高以及基因多样性等优势都使猪作为实验动物的首选。Von Hippel-Lindau（VHL）病为近几年来发现的相对来说比较罕见的常染色体显性遗传病,主要的临床学症状为中枢神经系统成血管母细胞瘤和肾细胞癌等，在小鼠中VHL基因敲除后会引发心血管等疾病。文献报道小鼠中Ksp-Cadherin16启动子介导的VHL基因特异性敲除后会诱发小鼠肾囊肿等疾病。Pax6启动子介导的VHL基因敲除后，小鼠眼睛出现异常，临床症状较明显。我们首先通过3′和5′RACE克隆得到猪VHL基因cDNA全长序列，Real-time PCR检测VHL基因在猪的各种组织器官中的表达模式。根据克隆获得猪VHL基因序列设计5对干扰片段来筛选有效的针对VHL基因的干扰片段。以稳定干扰VHL基因的猪胎儿成纤维细胞为核供体，构建克隆胚胎，检测猪VHL基因敲低后对克隆胚胎体外发育的影响。从而为构建疾病模型猪奠定基础。同时克隆肾小管上皮特异性启动子（KSP-Cdh16基因启动子）以及Pax6基因启动子，并分别对其活性进行验证，Real-time检测这两种启动子分别在肾小管上皮细胞中及角膜上皮细胞中能否有效的干扰猪VHL基因。所涉及研究内容及主要结果如下：（1）研究首先通过3′和5′RACE克隆得到猪VHL基因cDNA全长序列(2725bp)，定位于13号染色体上，CDS区域为618bp，共编码205个氨基酸。与人VHL基因DNA序列相似性为79.85%，氨基酸序列相似性为78.08%，与鼠VHL基因DNA序列同源性为71.36%，氨基酸序列同源性为76.10%。（2）Real-time PCR结果表明VHL基因广泛表达于猪的各种组织器官，其中在肾上腺、肝脏、胰腺、心脏和睾丸等组织器官高量表达。（3）进一步在猪iPS细胞中对5条干扰片段进行筛选，获得2条高效的干扰片段，干扰效率分别达到72%（P=0.0012）和64%(P<0.01)。（4）以稳定干扰VHL基因的猪胎儿成纤维细胞为核供体，构建克隆胚胎，结果表明，克隆胚胎的发育能力与对照组相比没有明显差异而且在克隆囊胚中VHL基因的干扰效率达到71%(P<0.01)。（5）克隆猪肾小管上皮细胞特异性启动子（1456bp）和Pax6基因（2140bp）启动子，通过组织特异性的干扰载体介导基因敲低。综上所述，本研究获得了猪VHL基因全长序列并获得该基因稳定敲低的猪细胞和胚胎，以及克隆获得猪肾小管上皮特异性启动子和Pax6基因启动子并验证其活性从而为VHL疾病模型猪的构建奠定了良好的基础。