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背景:乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是一个严重的世界范围公共卫生问题,据统计在全球约有3.5亿人口为慢性乙型肝炎感染者,全世界每年约有100万人死于HBV感染的相关性疾病。HBV是嗜肝部分环状双链DNA病毒,具有4个开放读码框架,即S区、X区、C区、P区;乙肝病毒基因具有较高的变异性,根据HBV全基因组序列≥8%的差异可将其分为A~H 8个基因型,目前最常见的HBV基因组变异是基本核心启动子(basal core promoter,BCP)区和前核心(precore,PC)区的变异,BCP/PC区变异的发生率又受到基因型的影响,给结果分析带来了更多的复杂性。因此,研究乙肝病毒的主要基因型及其变异特点,在乙肝病毒携带者及乙型肝炎的分子流行病学方面具有重要意义。本研究采用荧光定量PCR检测HBV的病毒载量及其基因型,巢式PCR及基因测序检测BCP/PC区的位点突变情况;分析蚌埠地区HBV感染的特点,HBV基因型和BCP/PC区变异情况在不同疾病进展中的作用,为临床预防和诊治提供合理的理论依据。方法:1.收集蚌埠医学院第一附属医院2013年6月至2014年6月就诊的乙型肝炎病毒患者268例血清标本,提取HBV DNA,采用荧光定量PCR检测HBV的病毒载量及其基因型,分析HBV的病毒载量与HBeAg、基因型之间的关系,以及基因型在本地区流行特点和在不同年龄人群中的分布情况。2.应用巢式聚合酶链反应(nested polymerase chain reaction,nested-PCR)扩增BCP/PC区基因,并对PCR产物进行DNA序列测定,使用Vector NTI软件比对分析BCP区核苷酸(nt)1762、1764位点变异和PC区的核苷酸(nt)1896位点变异情况,分析其在各个肝病组中分布情况以及与基因型和HBeAg的关系。结果:1.本组实验中268例乙型肝炎患者hbv基因分型结果:基因b型46例(17.16%)、基因c型202例(75.37%)、基因b+c混合型20例(7.46%),hbvc基因型检出率最高,b型次之,b+c型检出率最低,三者比较差异具有统计学意义(p<0.05)。hbv感染者的hbvdna阳性与hbeag阳性率呈正相关,且hbv感染者b、c基因型血清hbeag阳性率差异有统计学意义。hbvc型感染者hbvdna定量值(6.63±1.41lgcopies/ml)、b型(6.47±1.44lgcopies/ml)和b+c型(6.23±1.43lgcopies/ml)无明显差异,三组基因型之间与hbvdna载量间差异无统计学意义。不同年龄段感染者hbv基因型分布,在b基因型感染者中,以年龄小于35岁的感染人群为主(≤35岁患者占78.26%),而c基因型感染者中,大于35岁的人群的比例明显占优(>35岁患者中占68.81%),两组基因型的患者在年龄组成上具有统计学差异(p<0.05),而b+c型由于例数相对较少,未作比较。2.在所检测的245例患者血清中,检测出变异株134例,占54.7%;其中慢性乙肝(chb)、慢性重症肝炎(cshb)、肝硬化(lc)及肝癌(hcc)在a1762t/g1764a变异分别为22.4%、57.4%、46.7%、67.6%;g1896a变异分别为17.3%、48.5%、31.1%、41.2%;联合变异分别为8.2%、36.8%、15.6%、26.5%;其中cshb组、hcc组和lc组在a1762t/g1764a、g1896a以及联合变异中,其变异频率明显高于慢性乙肝组,差异具有统计学意义(p<0.01)。从hbvbcp区a1762t/g1764a变异频率来看,c基因型感染的患者明显比b基因型和b+c基因型的要高,三者比较具有统计学意义(p<0.05);hbvpc区g1896a位点变异在各基因型间基本无差异。hbeag阴性组检出变异株107例(65.2%),a1762t/g1764a变异87例(53.0%),g1896a变异66例(40.2%),联合变异46例(28.0%),hbeag阴性组变异率明显高于hbeag阳性组,而且随着患者病情的加重hbvbcp/pc区变异率呈逐级增高。结论1.蚌埠地区感染的乙型肝炎病毒是基因C型为主,B型次之,B+C型少见;基因型与乙肝患者HBe Ag阳性率、年龄等临床指标有一定的相关性。2.在HBV BCP/PC变异中,CSHB组、HCC组和LC组变异频率明显高于慢性乙肝组。3.HBV C基因型比其他基因型对病毒的变异具有更明显的影响。4.HBV前C区G1896A变异和BCP区A1762T/G1764A变异是导致HBeAg阴性的主要机制之一,可能加重HBe Ag阴性CHB患者病情的发展。