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5—脂氧合酶激活蛋白介导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的机制及MK886的保护作用心脑血管疾病是当前导致人类死亡的首位原因，动脉粥样硬化(AS)是心脑血管疾病最主要的病理基础。目前认为炎症反应是AS的主要发病机制之一。其中内皮细胞损伤是AS形成的始动环节，而氧化型低密度脂蛋白(ox—LDL)在AS的发病过程中起着关键的诱导作用。
白三烯(LTs)是花生四烯酸经5—脂氧合酶(5—LO)途径代谢的一种重要的炎症介质，最近的研究显示LTs与AS之间存在密切的关系。其中5—LO是LTs合成的关键酶，但是5—LO的活性必需有5—脂氧合酶激活蛋白(FLAP)的存在，FLAP对于维持5—LO的活性、调控LTs的合成非常重要。已有研究表明FLAP参与AS的发病过程，但是FLAP是通过何种途径参与AS的发生目前尚无明确报道。
设计了四个连续而又相互独立的实验，探讨FLAP参与血管内皮细胞氧化损伤的机制，以及FLAP抑制剂MK886对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用。
实验一 Ox-LDL对人脐静脉内皮细胞分泌白三烯C4的影响
目的：
探讨不同浓度的OX—LDL对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌白三烯C4(LTC4)的影响。
方法：
选择体外培养的HUVECs为研究对象，用不同浓度的ox—LDL进行处理。按照加入ox—LDL的终浓度不同随机分为5组：①对照组：细胞不做任何处理；②10mg/L ox—LDL组；③50mg/L ox—LDL组；④100mg/L ox—LDL组；⑤200mg/L ox—LDL组。每组6个样本，ox—LDL孵育细胞24h。采用ELISA方法检测细胞上清液LTC4水平，MTT法检测细胞活力。
结果：
1．与对照组比较，10mg/L ox—LDL组、50mg/L ox—LDL组的LTC4无差别(均为P＞0.05)；100mg/L ox—LDL组、200mg/L ox—LDL组的LTC4显著增加，差别有统计学意义(均为P＜0.01)。
2．与对照组比较，10mg/L ox—LDL组、50mg/L ox—LDL组的细胞存活率无差别(均为P＞0.05)；100mg/L ox—LDL组、200mg/L ox—LDL组的细胞存活率下降，差别有统计学意义(均为P＜0.01)。
3．LTC4水平与ox—LDL浓度呈正相关(r=0.953，P＜0.01)。
结论：
浓度超过100mg/L的ox—LDL氧化损伤HUVECs 24h后导致细胞活力下降，LTC4分泌增加，并且两者存在正相关：在观测范围内，ox—LDL浓度越大LTC4水平越高。
实验二 白三烯C4对人脐静脉内皮细胞损伤的作用
目的：
探讨不同浓度的LTC4对HUVECs损伤的作用。
方法：
选择体外培养的HUVECs为研究对象，用不同浓度的LTC4进行处理。按照加入LTC4的终浓度不同随机分为5组：①对照组：细胞不做任何处理：②10-10mol/L LTC4组；③10-9mol/L LTC4组；④10-8mol/L LTC4组；⑤白三烯受体拮抗剂BAY u9773组(10-8mol/LLTC4+lumol/L BAY u9773)。每组4个样本，孵育细胞24h。通过比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)水平，以及流式细胞术检测细胞凋亡。
结果：
1．与对照组比较，10-10mol/L LTC4组的LDH无差别(P＞0.05)；10-9mol/L LTC4组、10-8mol/L LTC4组的LDH增高，差别有统计学意义(分别为P＜0.05，P＜0.01)。
2．与对照组比较，10-10mol/LLTC4组的MDA无差别(P＞0.05)；10-9mol/LLTC4组、10-8mol/L LTC4组MDA增高，差别有统计学意义(均为P＜0.05)。
3．与对照组比较，10-10mol/LLTC4组的细胞凋亡率无差别(P＞0.05)；10-9mol/L LTC4组、10-8mol/L LTC4组细胞凋亡率增加，差别有统计学意义(分别为P＜0．05，P＜0.01)。
4．与10-8mol/LLTC4组比较，BAY u9773组的LDH、MDA及细胞凋亡率下降(分别为P＜0.01，P＜0.05和P＜0.05)。
结论：
浓度超过10-9mol/L的LTC4能够诱导HUVECs损伤及细胞凋亡的发生；白三烯受体拮抗剂BAY u9773能减轻LTC4所致的细胞损伤和凋亡。
实验三 FLAP参与人脐静脉内皮细胞氧化损伤的机制
目的：
探讨5—脂氧合酶激活蛋白(FLAP)在HUVECs氧化损伤中的机制。
方法：
选择体外培养的HUVECs为研究对象，用不同浓度的ox—LDL进行处理。按照加入ox—LDL的终浓度不同随机分为5组：①对照组：细胞不做任何处理：②10mg/L ox—LDL组；③50mg/L ox—LDL组；④100mg/L ox—LDL组；⑤200mg/L ox—LDL组。每组3个样本，ox—LDL孵育细胞24h。采用实时荧光定量PCR及Western blot检测细胞FLAP mRNA及蛋白表达的变化。
结果：
1．与对照组比较，10mg/L ox—LDL组、50mg/L ox—LDL组的FLAP mRNA水平无差别(均为P＞0.05)；100mg/L ox—LDL组及200mg/L ox—LDL组的FLAP mRNA表达增加，差别有统计学意义(均为P＜0.01)。
2．与对照组比较，10mg/L ox—LDL组、50mg/L ox—LDL组的FLAP蛋白水平无差别(均为P＞0.05)；100mg/L ox—LDL组及200mg/L ox—LDL组的FLAP萤白表达增加，差别有统计学意义(分别为P＜0.05及P＜0.01)。
3．0x—LDL浓度与FLAP mRNA、FLAP蛋自水平呈正相关，分别为(r=0.898，P＜0.01)和(r=0.944，P＜0.01)。
结论：
浓度超过100mg/L的ox—LDL作用HUVECs 24h能够上调FLAP mRNA和蛋自的表达。Ox—LDL浓度与FLAP mRNA、FLAP蛋白水平呈正相关。
实验四 FLAP抑制剂MK886对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用
目的：
探讨FLAP抑制剂MK886对HUVECs氧化损伤的保护作用。
方法：
选择体外培养的HUVECs为研究对象，按照加入ox—LDL及MK886的终浓度不同随机分为4组：①对照组：细胞不做任何处理；②100mg/L ox—LDL组：③5umol/L MK886组(5umol/L MK886+100mg/L ox—LDL)；④20umol/L MK886组(20umol/L MK886+100mg/L ox—LDL)。每组6个样本，ox—LDL孵育细胞24h。采用MTT法检测细胞活力，ELISA法检测细胞上清液LTC4水平。
结果：
1．与100mg/L ox—LDL组比较，5umol/L MK886组的细胞存活率无差别(P＞0.05)，20umol/L MK886组的细胞存活率升高(P＜0.05)。
2．与100mg/L ox—LDL组比较，5umol/L MK886组的LTC4无差别(P＞0.05)，20umol/L MK886组的LTC4水平降低(P＜0.01)。
结论：
20umol/L MK886能够减少LTC4的生成，对ox—LDL氧化损伤的HUVECs具有保护作用。FLAP参与ox—LDL促进HUVECs分泌LTC4、导致HUVECs氧化损伤的机制。