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本课题组前期研究已经从高低不同淋巴道转移潜能肝癌细胞株Hca-F和Hca-P中筛选出差异表达基因Annexin A7(ANXA7)和LEPR（瘦素受体），并发现这两个基因的表达可能与肿瘤淋巴道转移密切相关。LEPR和ANXA7在许多癌症中发挥重要作用，但迄今尚未研究它们在癌细胞中的分子关联。在Hca-F细胞中抑制ANXA7的表达诱导了增殖，迁移和侵袭能力的降低，并增加了凋亡细胞的数量。在该研究中，LEPR的沉默对Hca-F细胞的生物学行为的影响与膜联蛋白A7沉默相同。qRT-PCR，Western blot，酶联免疫吸附试验和免疫共沉淀试验进一步表明，LEPR的表达水平与ANXA7调节呈正相关，ANXA7调节介导LEPR在促进肝癌淋巴转移中的作用。此外，通过共免疫沉淀(co-IP)和免疫荧光染色实验还发现LEPR与ANXA7为相互作用蛋白。总之，这些发现揭示了LEPR在肿瘤细胞发生发展中的未被发现的作用，将LEPR定为肝癌有效治疗的靶标。 目的： 1.应用qPCR、Western blot、ELISA、细胞免疫荧光化学法检测比较Hca-F/Hca-P肝癌细胞（简称F/P）及其ANXA7沉默和过表达细胞中LEPR的表达。 2.应用CCK-8、transwell、流式细胞仪实验技术，检测LEPR对Hca-F肝癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学行为的变化。 3.应用免疫共沉淀法、细胞免疫荧光共定位验证ANXA7和LEPR为相互作用蛋白。 方法： 1.小鼠肝癌高低不同淋巴道转移潜能细胞株Hca-F和Hca-P的培养。 2.构建Hca-F/P细胞ANXA7沉默和过表达转染细胞株和Hca-F细胞LEPR沉默转染细胞株。 3.qPCR、Western blot、细胞免疫荧光化学法分别检测F/P、A7沉默F细胞、无关序列F细胞、A7过表达P细胞、无关序列P细胞中LEPR在mRNA、蛋白质水平的表达。 4.ELISA检测F/P、A7沉默F细胞、无关序列F细胞、A7过表达P细胞、无关序列P细胞上清中LEPR的表达。 5.CCK-8、transwell、流式细胞仪实验技术，检测LEPR对Hca-F肝癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学行为的影响。 6.免疫共沉淀法、细胞免疫荧光共定位验证F细胞中ANXA7和LEPR为相互作用蛋白。 结果： 1.LEPR在肝癌不同淋巴道转移潜能细胞中的表达情况：①qPCR、Western blot和细胞免疫荧光实验结果显示，LEPR在高淋巴道肿瘤转移潜能Hca-F细胞中的表达明显高于低淋巴道转移潜能肿瘤细胞Hca-P细胞。②ELISA实验结果说明，肝癌高淋巴道转移潜能细胞上清液中，Hca-F细胞中的LEPR表达显著高于Hca-P细胞。 2.LEPR表达调控对肝癌细胞生物学行为的影响：①CCK-8实验验证，LEPR表达沉默使肝癌Hca-F细胞细胞增殖能力减弱，说明LEPR表达可促进肝癌细胞Hca-F的生长，增强细胞的增殖能力。②Transwell实验结果说明LEPR表达沉默使Hca-F细胞的迁移和侵袭能力都下降，表明LEPR可促进肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。③流式细胞仪检测LEPR表达沉默，可诱导肝癌Hca-F细胞凋亡增加，说明LEPR可能促进肿瘤细胞的生长。 3.ANXA7与LEPR基因表达调控间的相互作用：①ANXA7对LEPR表达的调控作用，qPCR、Western blot和细胞免疫荧光实验结果显示，对比Hca-F细胞组和FNC细胞组，ANXA7沉默组LEPR表达水平显著降低。对比Hca-P细胞组和PNC细胞组，ANXA7过表达组LEPR表达水平显著升高。ELISA实验结果说明，在ANXA7沉默组细胞上清液中LEPR的表达明显低于Hca-F细胞和FNC细胞。在ANXA7过表达细胞上清液中LEPR的表达高于Hca-P细胞和PNC细胞。②LEPR对ANXA7基因表达的调控作用。qPCR和Western blot实验结果显示，对比Hca-F细胞组和FNC细胞组，LEPR沉默组ANXA7表达水平无明显差异。 4.ANXA7和LEPR为相互作用蛋白：①免疫共沉淀实验结果显示：在Hca-F细胞中ANXA7和LEPR共沉淀，在对照组中未见共沉淀。②细胞免疫荧光共定位实验结果表明：ANXA7与LEPR蛋白两种蛋白在细胞膜上共定位。 结论： LEPR基因在高淋巴道转移潜能Hca-F细胞中的表达高于低淋巴道转移潜能Hca-P细胞。LEPR促进肝癌肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和抑制肝癌细胞凋亡。研究还发现随着ANXA7的沉默或过表达，LEPR的表达水平均匀降低或增加，但LEPR不影响肝癌细胞中ANXA7的表达，说明LEPR是ANXA7介导的重要下游靶标。此外，我们的研究证明LEPR与ANXA7相互作用。LEPR-ANXA7相互作用可能有助于LEPR促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和抑制细胞凋亡。LEPR-ANXA7复合物可能代表肿瘤生长抑制和转移预防的潜在靶点，影响肿瘤的发生和发展。