论文部分内容阅读
研究背景与目的骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种磷酸化糖蛋白趋化因子,在肿瘤的发生发展中起重要作用。研究发现骨桥蛋白在多种癌组织中过度表达,因此被认为是一种能够有效监测肿瘤发展的标记物。有研究认为OPN是一种肿瘤转移相关蛋白,其在乳腺癌患者肿瘤组织中的高表达与乳腺癌的预后有关。本次实验我们分别通过RT-PCR和免疫组织化学法在基因和蛋白两个水平检测乳腺癌组织中OPN的表达,研究骨桥蛋白与乳腺癌临床病理学特征之间的关系,以期为进一步研究OPN的作用及乳腺癌的发展提供支持。研究方法收集2006年4月至2007年7月期间在山东大学附属济南中心医院治疗乳腺疾病的病例94例。其中66例原发性乳腺癌患者均经乳腺癌改良根治术治疗,其他则行乳腺肿块单纯切除术等治疗。94例患者的平均年龄为49岁(33-72岁)。本实验采用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学染色方法分别在基因和蛋白水平检测66例乳腺癌,37例正常乳腺组织(距离癌组织＞5cm)和28例良性乳腺肿瘤中OPN的表达。其中免疫组化的一抗采用山羊抗人单克隆抗体(mab53,Santa Cruz,美国)。OPN免疫组化染色结果判定根据Tuck等的半定量方法,对蛋白表达阳性细胞数占同类细胞的百分比(E)和阳性细胞染色强度(I)分别进行评分。E:0=无;1=＜1/100;2=1/100～1/10;3=1/10～1/3;4=1/3～2/3:5=＞2/3。I:0=无;1=轻度;2=中度;3=强染色,对染色范围和染色强度相加(I+E)作为总评分,0表示OPN阴性表达,2～8表示阳性表达应用肿瘤细胞染色强度(I)和染色范围(E)来决定。乳腺钼靶中的钙化评价分别由三位对患者资料全无知晓的影像学专家进行阅片。研究结果用RT-PCR法检测乳腺癌组织及乳腺良性肿瘤中的OPNmRNA表达指数分别为0.47±0.15和0.33±0.09,两者之间的差异有统计学意义(P＜0.01)。乳腺癌组织中c-erbB-2阳性组和淋巴结转移组的OPNmRNA表达指数分别高于c-erbB-2阴性组和淋巴结转移阴性组(P=0.015,P=0.004)。但是,乳腺癌组织学类型、肿瘤分级以及TNM分期均与OPNmRNA无关(P=0.14,P=0.073,P=0.47)。患者发病的年龄、肿瘤大小以及肿瘤淋巴结转移数目与OPNmRNA表达亦无相关关系(P＞0.05)。42例伴有微钙化的乳腺癌组织的OPNmRNA电泳条带的亮度明显大于无钙化组。以β-actin作内对照计算相对系数,钙化组和无钙化组分别为0.52±0.15和0.40±0.14,其表达差异有统计学意义(P=0,014)。钙化数量和钙化形态之间的OPNmRNA表达差异没有统计学意义(P＞0.05)。用免疫组化方法分析95例肿瘤的OPN表达。乳腺癌组织中OPN的表达水平(4.83)明显高于正常乳腺组织(1.86)和乳腺良性肿瘤(2.18)(P＜0.01);乳腺癌淋巴结转移阳性组与淋巴结转移阴性组之间OPN表达的差异有统计学意义(P=0.048)。同样,乳腺癌原发灶中OPN的表达明显高于相应转移淋巴结的OPN表达(P=0.03)。OPN的表达与肿瘤组织学类型、肿瘤分级以及TNM分期无关(P=0.50,P=0.41,P=0.80)。乳腺癌c-erbB-2阳性表达组OPN表达水平(5.22)高于c-erbB-2阴性组(4.00),但它们之间的差异无统计学意义(P=0.056)。钙化组OPN平均评分为5.24,较无钙化组(4.11)明显要高,且差异有统计学意义(P=0.032),但是OPN与钙化的数量和类型无关(P＞0.05)。结论1、研究发现,乳腺癌患者的OPN表达在基因和蛋白水平均与淋巴结转移和钙化关系密切,而与肿瘤的组织学类型、肿瘤分级、TNM分期无关。患者发病年龄、原发肿瘤大小以及腋窝转移淋巴结数目与OPN的表达亦没有相关性。2、OPN因其较好的灵敏度和特异性可能成为乳腺癌肿瘤标志物。在乳腺癌患者中,OPN可以反映肿瘤负荷。我们需要进行另外的前瞻性和回顾性研究,以便让我们更好的了解OPN的作用,进行更为精确的预后,为乳腺癌患者提供最优化的治疗。OPN可能作为组织学检测的一个补充,为早期诊断、监测复发和综合治疗提供新的依据。