【摘 要】
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目的1.探讨牛膝多糖免疫调节作用的机制.2.探讨纯化外周血T淋巴细胞的2种方法及其特点.方法1.以牛膝多糖(800μg/m1)分别对哮喘和肺癌病人的PBMC进行体外诱导培养,培养至18hr
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目的1.探讨牛膝多糖免疫调节作用的机制.2.探讨纯化外周血T淋巴细胞的2种方法及其特点.方法1.以牛膝多糖(800μg/m1)分别对哮喘和肺癌病人的PBMC进行体外诱导培养,培养至18hr时,收集细胞并抽提出RNA,使用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IFN-γmRNA和IL-4mRNA的表达率.2.密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,再分别以尼龙毛和免疫磁珠分离T细胞,再用流式细胞仪鉴定细胞纯度、计算细胞分离后的回收率、台盼蓝检测细胞活力、MTT法检测细胞增殖性能,并对这些指标进行分析.3.密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞,再经免疫磁珠分离出Th细胞,并经流式细胞仪鉴定纯度后,进行人Th细胞体外培养:(1)在6、12、18、24、36和48hr的不同时间内,以固定浓度的牛膝多糖(800μg/ml)体外诱导培养人Th细胞;(2)以0、100、200、400和800μg/m1的不同浓度ABPS体外诱导培养人Th细胞至18hr或48hr.培养至相应时间后,分别收集细胞并抽提细胞中RNA和收集上清培养悬液,分别采用RT-PCR和ELISA检测Th细胞所分泌的细胞因子(IFN-γ和IL-4)在转录水平和翻译水平的变化.结论1.应用ABPS能初步逆转肺癌和哮喘患者Th1和Th2细胞因子的失平衡.2.在细胞生物学研究中,免疫磁珠分离法是有效分纯T细胞的较佳方法.3.ABPS能在转录水平和翻译水平促进Th1类细胞因子的分泌,而抑制Th2类细胞因子的分泌.
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