【摘 要】
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大肠杆菌精氨酰-tRNA合成酶(ArgRS)是由577个氨基酸残基组成的单链蛋白.从其基因序列推导的蛋白质序列可知该酶含有四个半胱氨酸裂残基,分别位于第24位,第320位,第520位和第5
【机 构】
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中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所
【出 处】
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中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院生物化学
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大肠杆菌精氨酰-tRNA合成酶(ArgRS)是由577个氨基酸残基组成的单链蛋白.从其基因序列推导的蛋白质序列可知该酶含有四个半胱氨酸裂残基,分别位于第24位,第320位,第520位和第537位.从前的实验证明,ArgRS在天然条件下有两个半胱氨酸残基在被5,5-二巯 基-2,2-硝基苯甲酸(DTNB)滴定;N-乙基马来酰胺(NEM)可修饰两个巯基,它们也是DTNB敏 感的两个巯基,修饰后的酶活几乎完全丧失;仅有一个巯基可被碘代乙酰代乙酰胺(IAA)修 饰,该巯基也是DTNB敏感的两个巯基之一,IAA的修饰可使酶活力下降约50i.该文通过用NEM、IAA和DTNB对变种酶ArgRSC24A、ArgRSC320A、ArgRSC520和ArgRSC537A及该文新构建的ArgRSC320-537A的化学修饰证胆,在天然条件下ArgRS中被DTNB和NEM修饰的两个半胱氨酸残基位于第320位和537位,被IAA修饰的位于第320位.虽然NEM和IAA的修饰结果说明第320和537位的两个半胱氨酸残基位于酶分子的表明,可能是ArgRS酶活力的必需氨基酸,但这两个位 点的半胱氨酸分别或同时突变为丙氨酸的变种酶都保留了约30i以上的氨酰化活力,证明这 两个半胱氨酸残基并非是该酶的必需氨基酸.巯基试剂NEM、IAA导致酶活力剧烈下降的原因可能是因为引入了立体障碍的缘故.
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