论文部分内容阅读
糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)及其慢性并发症已经严重威胁到人们的健康。DM常并发血管及血栓性疾病。血栓前状态分子标志物之一的纤溶活性指标—纤溶酶原激活物抑制物-1(Plasminogen Activator Inhibtor1，PAI-1)的变化与血栓形成密切相关。PAI-1是组织型纤溶酶原激活物(tissue Plasminogen Activator，t-PA)和尿激酶型纤溶酶原激活物(urine Plasminogen Activator，u-PA)的特异性快速抑制剂。t-PA/PAI-1是调节纤溶系统生理功能的一对重要产物，他们之间的生理平衡对调节血流畅通起到了重要作用。目前许多研究已经阐明了糖尿病大血管病变、糖尿病肾病(DN)、糖尿病性视网膜病变(DR)与PAI-1的密切相关性，而糖尿病心肌微血管病变与PAI-1关系尚未发现有关报道。流行病学研究显示：临床上一些糖尿病心绞痛的患者，排除了患者以前有冠状动脉性心脏病或风湿性心脏病，并且排除年龄、血压、体重和血清胆固醇等危险因素，冠脉造影也显示无明显异常，经过扩冠、活血化瘀、降脂治疗后，症状明显缓解。其机制之一可能是糖尿病时微血管内皮损害及其炎性因子共同促进了心肌组织PAI-1mRNA的表达，心肌微血管内PAI-1水平增加，t-PA/PAI-1调节失衡，局部纤溶活性受抑，血液呈现高凝状态，微血栓形成，最终导致微血管病变。本研究通过建立糖尿病大鼠模型，观察糖尿病心肌微血管的改变与心肌组织PAI-1mRNA相关性，为临床上对糖尿病患者使用抗凝剂及糖尿病患者预防心血管疾病提供实验依据。
目的：建立糖尿病大鼠模型，观察糖尿病对心肌微血管的影响，研究糖尿病心肌微血管的改变与PAI-1mRNA相关性，并进一步探讨增龄是否对心肌微血管及PAI-1mRNA表达有影响。
方法：1.将老龄及青年雄性SD大鼠适应性喂养3天后，分别随机分为老龄糖尿病造模组、老龄对照组、青年糖尿病组、青年对照组共4组，造模组以55mg/Kg剂量一次性腹腔注射STZ液。对照组大鼠腹腔注射等量的柠檬酸盐缓冲液。各组喂养72h后于尾尖部测空腹血糖。2.喂养8w后，处死大鼠，取部分左心室组织做免疫组化；剩余部分留做心肌组织PAI-1 mRNA检测。3.采用EnVision免疫组化法，CD34抗体检测心肌微血管内皮细胞特异性抗原CD34。光学显微镜倍数：250×，视野面积0.034mm2，每个标本随机观测3个视野，采用医学图像分析软件计数心肌微血管数目(棕黄色圆形、椭圆形或半椭圆形为一个微血管)。3.Real-Time PCR(SYBR Green I)法检测各组心肌组织PAI-1 mRNA的表达。
结果：1.造模72h后，青年糖尿病组空腹血糖值显著高于青年对照组(20.31±2.64 vs4.96±0.50，P＜0.01)；老龄糖尿病组空腹血糖值显著高于老龄对照组(21.63±4.67 vs5.33±0.44，P＜0.01)。2.造模8W后，青年糖尿病组体重显著低于造模前(193.36±11.72vs343.59±14.11，P＜0.01)；老龄糖尿病组体重显著低于造模前(284.81±15.58 vs532.90±13.28，P＜0.01)。3.免疫组化检测大鼠心肌微血管数目结果：老龄糖尿病组心肌毛细血管数目与老龄对照组相比显著减少(23.73±1.20 vs84.87±3.59，P＜0.01)；青年糖尿病组大鼠心肌微血管数目与青年对照组相比显著减少(55.40±6.69 vs97.87±7.09，P＜0.01)；老龄糖尿病组大鼠心肌微血管数目显著低于青年对照组(23.73±1.20 vs97.87±7.09，P＜0.01)；老龄糖尿病组大鼠心肌微血管数目显著低于青年糖尿病组(23.73±1.20 vs55.40±6.69，P＜0.01)；而老龄对照组大鼠心肌微血管数目与青年对照组相比无统计学差异(84.87±3.59vs97.87±7.09，P＞0.05)。4.心肌组织PAI-1mRNA的表达结果：各年龄段大鼠，糖尿病组心肌PAI-1mRNA相对表达量与同龄对照组相比显著增多(P＜0.01)；老龄糖尿病组大鼠心肌PAI-1mRNA相对表达量与青年糖尿病组相比显著增多(P＜0.01)；老龄糖尿病大鼠心肌PAI-1mRNA相对表达量显著高于青年对照组(P＜0.01)；老龄对照组大鼠心肌PAI-1mRNA相对表达量高于青年对照组(P＜0.05)。
结论：1.选用雄性SD大鼠，以1％链脲佐菌素(STZ，用0.1mol/L、pH4.2柠檬酸盐缓冲液配制)按照55mg/Kg剂量腹腔注射，可成功建立糖尿病大鼠模型。2.糖尿病大鼠心肌微血管数目减少。3.增龄对糖尿病大鼠心肌微血管数目有影响，而对非糖尿病大鼠无明显影响。4.各年龄段大鼠心肌微血管数目减少，心肌组织PAI-1mRNA表达增强，提示糖尿病大鼠心肌微血管病变与心肌组织PAI-1mRNA的表达有一定相关性。
5.增龄影响糖尿病大鼠心肌组织PAI-ImRNA表达。提示临床上对于糖尿病患者特别是老年糖尿病患者，使用抗凝剂对预防其心肌微循环血栓形成具有重要的意义。