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海马是中枢边缘系统的重要脑区,机体的许多生理功能如学习记忆等与其有着密切的关系。促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)是下丘脑分泌的多肽类激素。近年来发现,CRH作为一种重要的神经递质／调质,能通过其受体在情绪反应、学习记忆以及神经系统损伤与发育等方面发挥重要的生理作用。CRH受体分为两型：CRHR1和CRHR2,它们介导了海马不同的生理功能。目前,有关CRH两型受体对海马神经元突起发育的调节作用及其内在机制尚未完全阐明。前期研究显示,CRH能促进海马神经元突起发育,但CRH这种作用所涉及的受体机制尚不清楚。因此,我们以原代培养的大鼠海马神经元为研究对象,观察CRH两型受体对海马神经元突起发育的调节作用。其次,我们研究了CRH两型受体调节神经元树突发育可能涉及的相关分子。本课题选择了两类神经元突起发育相关蛋白,塌陷反应介导蛋白3(CRMP3)以及动力蛋白类似蛋白1 (MKLP1),观察CRH两型受体对它们的调节作用；并进一步给予PKA、PLC、PKC等蛋白激酶的抑制剂和激动剂,研究CRH两型受体作用的细胞内信号转导机制。主要实验结果如下：一、CRH两型受体对原代培养海马神经元突起发育的调节应用磷酸钙转染法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转入原代培养的大鼠海马神经元中,观察到CRH能增加神经元树突总长度(TDBL),而CRH这种作用能被CRHR1特异性的拮抗剂Antalarmin所阻断,但不能被CRHR2特异性的拮抗剂Astressin 2B所阻断,提示CRHR1激活能促进海马神经元树突发育。而仅对CRHR2具有亲合力的UrocortinⅡ能减少神经元TDBL,提示CRHR2激活能抑制海马神经元树突发育。二、CRH两型受体对原代培养海马神经元突起发育相关蛋白的调节(一)CRH两型受体对海马神经元CRMP3的调节1.免疫荧光细胞化学结果显示,原代培养的大鼠海马神经元上表达CRMP3蛋白。2.荧光实时定量PCR和、Vestern blot的结果显示,CRH能减少海马神经元CRMP3 mRNA和蛋白的表达,呈剂量依赖关系；进一步研究还证实,CRH对CRMP3表达的调节作用能被CRH受体广谱的拮抗剂Astressin或CRHR2特异性的拮抗剂Astressin 2B所阻断,但不能被CRHR1特异性的拮抗剂Antalarmin阻断；而仅对CRHR2具有亲合力的UrocortinⅡ能下调CRMP3的表达；时间曲线显示,Urocortin