柑橘皮中黄酮类化合物提取和纯化方法研究

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本研究选取四川常见的4种柑橘果皮(温州蜜柑、罗伯逊脐橙、琯溪蜜柚和彭祖寿柑)为原料,以果皮中的黄酮提取率为试验指标,筛选出最优品种,分别进行水浴浸提、微波萃取和超声波辅助提取,研究了3种不同方法下的不同工艺条件对其黄酮类化合物提取效果的影响,并进一步探讨了大孔树脂纯化黄酮类化合物的工艺。主要研究结果如下.1.柑橘皮中黄酮类化合物含量的分光光度测定方法中,以芦丁为标样,亚硝酸钠-硝酸铝法-氢氧化钠法显色,510nm处分光光度法检测。对其进行方法学考察,芦丁质量浓度在0.00517~0.09306mg/mL范围内,呈良好的线性关系,r=1.0000,平均回收率为96.69%。该方法准确度较高、重现性好、操作简单且快速,适用于黄酮类化合物的定量检测。2.按照相似相溶的原理,本试验选择了7种溶剂在相同的条件下提取柑橘皮黄酮类化合物,综合考虑安全性及黄酮提取率,选择乙醇为最佳提取溶剂。采用Duncan氏法比较了在同一乙醇水浴浸提条件下的4种柑橘果皮的黄酮提取效果,确定温州蜜柑为黄酮提取的最佳品种。以黄酮提取率为试验指标,乙醇为提取溶剂,通过单因素试验和正交设计确定了水浴浸提、微波萃取和超声波辅助提取柑橘皮黄酮类化合物的最佳工艺条件。水浴浸提的最佳工艺条件为:乙醇浓度60%,料液比1:25(g/mL),浸提时间2.0h,浸提温度为55℃,黄酮提取率为8.92mg/g;微波萃取的最佳工艺条件为:乙醇浓度70%,料液比1:40(g/mL),辐照时间8min,微波功率400W,黄酮提取率为11.23mg/g;超声波辅助提取的最佳工艺条件为:超声波功率150W,乙醇浓度80%,料液比1:40(g/mL),超声时间35min,提取温度55℃,黄酮提取率为14.14mg/g。三种方法进行比较,超声波辅助提取黄酮的得率最高,且操作简单、易于控制。因此,对柑橘皮黄酮的提取宜采取超声波辅助法。3.柑橘皮中黄酮类化合物的大孔树脂纯化工艺研究。采用大孔树脂HPD600、S-8、HPD400、AB-8、D101、X-5纯化柑橘皮黄酮粗提液。通过6种树脂对黄酮类化合物的吸附与解吸特性的研究,确定了AB-8型大孔树脂综合性能最好。采用单因素和正交试验优化出AB-8树脂纯化黄酮的最佳工艺条件:上样浓度0.15mg/mL,上样流速0.5ml/min,上样体积5BV,乙醇浓度70%,洗脱流速1.0ml/min,洗脱体积5BV,总黄酮回收率为76.91%。在此工艺条件下,大孔树脂可重复利用10次。4.柑橘皮黄酮类化合物进行定性检测。通过化学显色法和薄层层析法的试验结果表明,柑橘类黄酮化合物主要是二氢黄酮,其中包括橙皮苷和柚皮苷。
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