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研究背景：
雷公藤内酯醇(Triptolide，TR)，又称雷公藤内酯、雷公藤甲素、PG490，是从卫矛科雷公藤属植物中成功分离提纯出的环氧二萜化合物。当前研究发现TR具有抗炎、抗肿瘤、免疫抑制、抗生育作用等多种生物活性!进一步对该药的探索发现TR发挥生物活性的主要作用机制是诱导细胞凋亡；在妇产科领域，多年来一直将雷公藤提取出的混合制剂“雷公藤多甙”在内科使用中出现的女性闭经与不孕这一性腺抑制现象归为毒副作用，回避多于探索。直至近期，国内学者发现在妇科子宫内膜异位症、子宫肌瘤等患者中使用雷公藤提取物得到良好治疗效果，使人们开始认识到雷公藤内酯醇作为雌激素拮抗剂和免疫调节剂可推广使用到妇科临床并治疗上述雌激素依赖性疾病。但是TR对女性生殖系统，尤其是对卵巢卵泡发育的影响及其作用机制尚未阐明。TR对女性性腺活动抑制的程度及其是否导致卵巢生殖潜能永久性损害等重要问题亟待研究。
研究目的：
通过动物体内实验，研究不同剂量TR处理后大鼠动情周期和卵巢组织学的改变，客观计数各级卵泡数目变化和卵泡凋亡率，探讨TR的卵巢抑制机制；并且设置停药恢复观察组，进一步研究药物作用的可逆性。
方法：
选取性成熟、有规律动情周期的健康雌性SD大鼠60只，随机分为以下6组(每组10只)：空白对照组无用药处理；安慰剂对照组每日给予蒸馏水灌胃(含0.06％溶媒二甲基亚砜)；TR高剂量组、TR低剂量组每日分别灌喂120 μg／kg／d、60 μ g／kg／d的TR(0.06％二甲基亚砜溶解后配制)；以上各组处理期共35天；另外设立高、低剂量停药恢复组，此2组大鼠分别给予前述35天TR高、低剂量灌胃处理后，继续停药饲养30天，观察处理期后有无药物延迟作用以及药物的影响能否恢复。整个观察期间，各组大鼠每日阴道涂片观察动情周期；每隔4天测量体重以调整用药剂量并观察动物生长情况。观察期末，麻醉手术、活体取材大鼠左侧卵巢后处死动物，卵巢即刻固定，石蜡包埋后连续切片进行组织学研究，分类计数各组大鼠卵巢切片中原始卵泡、次级卵泡、窦卵泡的数目进行组间比较；并用TUNEL(脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的DNA缺口末端标记)法对卵巢切片中的凋亡细胞进行原位标记，显微镜下辨认标记的凋亡卵泡(出现卵母细胞凋亡着色或10％以上的颗粒细胞凋亡着色的卵泡)，也按原始卵泡、次级卵泡、窦卵泡三个不同发育阶段分类计数。
结果：
1.TR作用下大鼠生长状况未受影响
实验全程大鼠基本生活状态良好，未出现病、死现象；处理前、后各组大鼠体重差异无统计学意义；与对照组相比，本研究未发现TR处理后大鼠生长受限。2.TR作用下大鼠动情周期发生改变高剂量组大鼠出现明显的动情周期延长(动情周期平均5.674±1.45天)，与低剂量组、安慰剂对照组相比差异均有统计学意义(P值分别为0.001、<0.001)；而且此组大鼠中44.5％的个体出现过动情周期缺失，而其它各组仅有不到18％的个体会出现这种比较明显的动情周期停滞现象；但停药观察期，高剂量停药恢复组大鼠的动情周期平均水平较用药期显著下降(4.174±0.59)，停药前后相比差异有统计学意义(p=0.010)，而且该组停药期动情周期长短与对照组相比差异则无统计学意义，结果显示恢复期该组大鼠动情周期回复到正常水平。低剂量组大鼠动情周期则未受明显抑制，其动情周期长短与对照组相比无统计学差异。
3.组织形态学研究发现TR处理组大鼠卵巢中次级卵泡分布改变
高剂量组和低剂量组大鼠卵巢内次级卵泡的计数较对照组均明显增加，差异有统计学意义(p<0.05)；而各组间原始卵泡和窦卵泡计数的差异则无统计学意义；进一步比较高、低剂量组间次级卵泡的计数水平虽无统计学差异，然而从所得数值看出，低剂量组次级卵泡均数(13.9±2.33)要略高于高剂量组(12.0±1.55)；高、低剂量停药恢复组各阶段的卵泡计数则与对照组相比无统计学差异。除此以外，各组大鼠卵巢组织形态学研究未发现卵巢坏死、变性等受损表现。
4.TR处理组大鼠卵巢中次级卵泡凋亡率明显增高
高剂量组和低剂量组大鼠均出现次级卵泡凋亡率的明显增加，分别为：31％、32％，与安慰剂和空白对照组(凋亡率分别为12％、13％)相比差异均有统计学意义(p<0.01)；而各组间原始卵泡和窦卵泡凋亡率的差异无统计学意义。经过停药恢复期，低剂量停药恢复组大鼠卵巢内次级卵泡的凋亡率(21％)与低剂量处理组的凋亡率(32％)相比显著降低(p=0.043)，而与对照组相比则凋亡率无统计学差异；高剂量停药恢复组的次级卵泡凋亡率为26％，与高剂量处理组的凋亡率(31％)相比差异尚无统计学意义；
结果显示：不同剂量的TR都可促进卵巢内次级卵泡细胞的凋亡，导致次级卵泡发育停滞而在卵巢中堆积，但尚未出现大量卵泡耗竭。低剂量组停药后这种改变能很快恢复；而高剂量TR对卵巢抑制和诱导次级卵泡凋亡的作用似乎更强，经过停药观察期，高剂量恢复组动情周期长短已恢复到对照组水平，但次级卵泡凋亡率虽呈现下降趋势却未完全恢复。
结论：
1.雷公藤内酯醇抑制雌性大鼠卵巢内卵泡发育并导致动情周期延长；这种抑制的主要环节在于TR可通过诱导大鼠卵巢内次级卵泡细胞的凋亡而产生抑制卵泡发育的作用。
2.TR抑制次级卵泡群的发育，而对卵巢储备的原始卵泡群未产生显著影响。
3.TR对大鼠动情周期的抑制、对卵泡发育的影响具有剂量依赖性和可逆性。