巨尾桉人工miR398表达载体的构建与转化

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桉树是桃金娘科(Myrtaceae)桉属(Eucalyptus)植物的总称,起源于澳大利亚。桉树具有生长快、产量高、耐贫瘠等优良特性,在世界各地广泛种植,是世界四大速生造林树种(桉、杨、松、竹)之一。  miR398是最早被报道的受氧化胁迫负调控的miRNA,人工小RNA(amiRNA)是在天然miRNA前体结构的基础上,替换天然miRNA骨架中的核心片段,在生物体内经过剪切加工最终形成的成熟的外源miRNA。构建amiRNA表达载体并转入植物进而研究内源miRNA对植物的生理影响是研究miRNA功能的重要途径。  本论文以龙眼miR398a和miR398b/c前体序列为模板,设计人工miR398合成的引物,以拟南芥miR319前体作为骨架,通过重叠PCR法,获得人工miR398a和人工miR398b/c基因,并转入pBI121二元表达载体,得到amiR398a正向连接的二元表达载体Z-pBI398a和反向连接的二元表达载体F-pBI398a以及amiR398b/c正向连接的二元表达载体Z-pBI398b/c和反向连接的二元表达载体F-pBI398b/c。并通过土壤农杆菌LBA4404转化巨尾桉,得到巨尾桉芽分化组培植株。
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