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柑橘是世界上重要的经济水果,深受人们喜爱。柑橘又是一种畏寒、喜温、忌盐碱的果树。周期性冻害、突发性寒潮,及海涂盐渍地、过渡耕作产生的次生盐渍化,不同程度地影响着柑橘的产量及品质。研究柑橘在冷、盐逆境下的生理变化及抗性调节具有重要的理论和现实意义。 本文采用生长均一性好、逆境条件易于控制的愈伤组织研究体系,对柑橘不同品种愈伤组织在逆境下的生理变化、外源多胺对逆境下的抗性调节以及多胺合成酶类的基因SAMDC的分离和表达作了初步的研究。主要研究结果如下: 1.对柑橘愈伤组织进行盐(NaCl)胁迫(0mmol/L-200mmol/L)35d后测定其增重情况发现:低盐浓度,尤其是25mmol/L对愈伤的生长有促进作用。而150mmol/L以上,愈伤的生长受到抑制,200mmol/L以上愈伤大量死亡。不同品种间的表现不同,构头橙在150mmol/L以下的盐胁迫中表现了较强的抗盐性,宁波金柑次之,纽荷尔最差。 2.对柑橘愈伤进行低温胁迫(4℃,0h-9d)处理后培养35d测定其增重情况发现:低温胁迫12h和24h对愈伤的生长有明显促进作用,而低温胁迫5d以上,生长缓慢,低温胁迫9d以上的生长基本停止。不同品种间也表现了差异,其中构头橙对低温表现更敏感,胁迫5d后愈伤的增殖明显减缓。 3.在盐胁迫对柑橘愈伤组织的电导率及丙二醛含量的研究中发现:随着胁迫时间的增长,相对电导率的值表现为持续上升,24h以下的上升幅度较大;同样的,丙二醛的含量也是随胁迫时间的加长而逐渐上升;相反,在4℃低温胁迫中发现,相对电导率变化不大,而丙二醛的含量有所增加。表明高盐胁迫中的细胞膜受到较大程度损伤。 4.外加0.5mmol/LSpd对愈伤的生长有促进作用。0.5mmol/L的Spd对盐胁迫和低温胁迫下的愈伤的生长同样有促进作用。在短时间盐胁迫和低温胁迫下,Spd极大地促进了愈伤的增殖。而在较长时间的胁迫后,Spd的作用不明显。在进一步的相对电导率的测定中发现,盐胁迫下愈伤的电导率在加入Spd后下降,而低温胁迫下的加入Spd前后的愈伤变化不大。 5.通过分离SAMDC基因片段来实现对多胺类基因的表达研究。分离获得SAMDC基因片段(743bp),经过半定量RT-PCR研究发现:在低温胁迫中,胁迫后的愈伤组织中SAMDC的表达量均有上升,尤以胁迫1d的上升较为明显,且与膜受伤害程度的