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[目的]:检测GRP78在结直肠癌组织、腺瘤组织及正常粘膜组织中的表达情况,探讨其在结直肠癌组织中表达的意义;观察靶向shRNA质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78)对人大肠癌细胞系GRP78 mRNA及蛋白的抑制作用。[方法]:(1)采用免疫组织化学及RT-PCR检测GRP78在结直肠癌组织、腺瘤组织及正常粘膜组织中的表达。(2)使用脂质体2000将GRP78靶向shRNA质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78)转入人大肠癌细胞系RKO内,通过RT-PCR和Western-blot,分别在mRNA和蛋白水平上,检测转染前后GRP78在RKO细胞系中的表达变化。[结果]:(1)免疫组织化学结果显示:结直肠癌组织GRP78蛋白的表达水平显著高于正常粘膜组织(P＜0.05);腺瘤组织中GRP78蛋白的表达水平高于正常粘膜组织而低于癌组织(P＜0.05);在结直肠癌组织中未发现性别、年龄、分化程度、淋巴结转移等因素与GRP78蛋白的表达有关(P＞0.05)。RT-PCR结果显示:正常粘膜、腺瘤和腺癌组织中GRP78mRNA的表达无明显差别(P＞0.05)。(2)将靶向shRNA质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78)转入大肠癌细胞系RKO后,以G3PDH的表达做为内对照,RT-PCR结果显示:与转染前相比,转染PGPU6/GFP/Neo-GRP78后GRP78mRNA的相对表达水平有显著性差异(P＜0.05);转染后24h、48h和72h,随着时间延长,其在实验组中的表达逐渐降低(P＜0.05);且转染后48h表达水平趋于稳定,与72h相比,无显著性差异(P＞0.05)。阴性对照组与转染前相比,GRP78mRNA的相对表达量无显著性差异(P＞0.05)。(3)将靶向shRNA质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78)转入大肠癌细胞系RKO后,以β-actin的表达做为内对照,Western-blot结果显示:与转染前相比,转染GPU6/GFP/Neo-GRP78后GRP78蛋白的相对表达水平有显著性差异(P＜0.05);转染后48h、72h和96h,随着时间延长,其在实验组中的表达逐渐降低(P＜0.05);且转染后72h表达水平趋于稳定,与96h相比,无显著性差异(P＞0.05);阴性对照组与转染前相比,GRP78蛋白的相对表达量无显著性差异(P＞0.05)。[结论]:(1)GRP78在正常结直肠粘膜组织、腺瘤组织、腺癌组织中的表达呈逐渐增高的趋势,参与了结直肠癌的发生过程。但是在mRNA水平上,未发现GRP78的表达水平在三种组织中有差异,我们推测在结直肠癌的发生过程中,GRP78的表达变化可能发生在翻译后水平。(2)靶向shRNA质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78)能明显抑制大肠癌细胞系GRP78 mRNA及蛋白的表达,为进一步明确GRP78在癌细胞增殖动力学中的作用奠定了实验基础,同时也为结直肠癌的基因治疗提供了新思路。