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原发性支气管肺癌(primary bronchogenic carcinoma)的发病率及致死率有逐年上升的趋势,对肺癌发病相关因素及提高治疗效果的深入探究,以期早期发现,准确诊断、良好治疗,一直是研究者追求的目标。近年来不少研究表明,恶性肿瘤的生长、转移呈血管依赖性,新生血管不但为恶性肿瘤的生长提供了充足的养分、排泄代谢废物,还为肿瘤细胞的转移提供了良好的通道。肿瘤血管的生成在恶性肿瘤的发生、发展、侵袭、转移及复发中,起着重要作用。因此抗血管生成治疗联合细胞毒药物有望提高恶性肿瘤治疗的效果。重组人血管内皮抑素(重组人血管内皮抑素)是由我国自行研制生产的抗血管生成药物。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor1alpha,HIF-la)、信号素3A(Semaphorin3A,Sema3A)、CD105(endoslin, EDG)参与了肿瘤血管生成及发展的过程,在恶性肿瘤的生物学行为中起重要作用。本实验则通过动态对比观察不同组别Lewis肺癌移植瘤小鼠的体重、肿瘤体积及血管生成相关因子VEGF. HIF-1α、Sema3A、CD105表达的变化,及肿瘤组织内肿瘤细胞及血管形态的变化来证实重组人血管内皮抑素联合顺铂能提高治疗效果,并阐述可能的机制,从而为重组人血管内皮抑素广泛应用于临床以及研究肺癌血管正常化可能的发生机制提供实验基础。实验主要由以下几部分组成：1.动物模型的建立、分组及给药方法培养小鼠Lewis肺癌细胞,接种于C57BL/6小鼠右腋下建立移植瘤模型,接种Lewis肺癌细胞后8-10天,荷瘤鼠接种处皮下可触到黄豆大小肿块,并随时间延长逐渐增大。2周后挑选56只肿瘤直径8mm左右荷瘤鼠,随机分为4组：A组：生理盐水组：B组：重组人血管内皮抑素组；C组：顺铂组；D：重组人血管内皮抑素+顺铂组。每次给药前根据测量的体重调整给药量。在给药后第2d、4d、6d、8d、10d、12d、14d每组各处死2只小鼠,取出肿瘤组织,固定。2.给药后小鼠一般情况的观察以A组小鼠的一般情况为标准,随给药时间的延长,B组小鼠饮食、活动情况基本正常,体重及肿瘤体积较A组增长缓慢。C组小鼠逐渐出现精神差,饮食及活动量明显减少,毛色灰暗无光泽,蜷缩扎堆,体重下降最明显,瘤体积较B组为小。D组小鼠一般情况较C组为好,但差于B组,体重较C组为高,瘤体积小于C组。3.肿瘤组织的病理观察大体观察：肿瘤血管丰富,质脆,易出血,肿瘤细胞浸润周围组织及皮肤,界限不清,不易剥离,出血明显,切面呈鱼肉状,中间有坏死区。HE染色光镜下观察：癌细胞数量大,细胞排列紧密,细胞体积大,核大,间质血管丰富。4.肿瘤血管生成相关因子表达的观察待肿瘤组织全部取出后,免疫组织化学方法观察促血管生成的相关因子VEGF、HIF-1α,以及抑制血管生成因子Sema3A的表达。结果显示：四组均可见VEGF的阳性表达,A组表达最高(153.67±5.40),D组表达最低(78.79±7.83)。HIF-1α亦在四组中呈阳性表达,A组表达最高(142.10±4.18),D组表达最低(60.05±9.70)。两者均在化疗开始后B组和D组第2天表达最高,第4-8天表达最低,第9-14天表达强度逐渐升高,但比第2天表达低。Sema3A在A组及C组未见其表达,D组表达最高(75.48±15.77),B组(66.65±10.64)。化疗开始后第2天未见表达,第4-8天表达较高,第9-14天表达强度逐渐下降。5.肿瘤组织内血管密度检测免疫组织化学方法检测CD105,光镜下观察肿瘤组织内血管,最后参照Weidner法进行微血管密度(microvessel density, MVD)的计数,取5个高倍视野的平均值,显示：A组20.00±3.45,D组16.49±7.26。并且其表达差异与给药后不同时间点有关,在第2天表达最高,第4-8天表达最低,第9-14天表达强度逐渐升高。6.电镜下肿瘤细胞及血管结构的观察电镜下,各组中肿瘤组织内肿瘤细胞相似,胞内核仁大,线粒体、内质网、高尔基体等细胞器发达。血管结构表现无明显差别,血管内皮细胞肿胀,细胞内细胞器发达。综上所述,Lewis肺癌细胞接种于C57BL/6小鼠后2周左右,可全部成瘤,为做小鼠肺癌移植瘤实验提供可用途径。通过观察小鼠一般情况、体重、体积的变化,血管生成相关因子及微血管密度的表达情况,说明重组人血管内皮抑素既能抗血管生成,又能提高顺铂治疗肿瘤的效果,机制可能为重组人血管内皮抑素通过使肿瘤血管出现正常化来改善血流,进而使细胞毒药物能更好的作用于肿瘤组织内。但是电镜观察发现,各组不同时间点肿瘤组织内血管形态未见明显变化,原因可能为重组人血管内皮抑素导致血管正常化可能为研究者的理论推断,或者用药时间短,尚不能引起形态学的变化。Sema3A为抑制肿瘤血管生成因子,研制成为制剂可能为临床治疗肿瘤血管生成提供新途径,CD105表达于增殖的血管内皮细胞,研制抗CD105制剂同样可能提供治疗肺癌新思路。