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研究背景子痫前期是严重危害孕产妇健康及造成围产期新生儿死亡的重要原因。近年来,对子痫前期的的病因和病理生理有了更深的认识,但其病因和确切发病机制至今尚未阐明,给子痫前期的预防和治疗带来困难。国内外学者提出内皮细胞激活损伤学说、免疫学说、氧化应激学说、炎症学说、一元化学说等试图来阐明子痫前期的发病机制。大量研究表明,子痫前期发病的中心环节为广泛的血管内皮损伤,而氧化应激及氧自由基的产生是内皮细胞受损的重要因素。在缺氧状态下氧化应激及氧自由基生成增加,并且与胎盘低灌注和子痫前期发生相联系。氧化应激及氧自由基进一步加重内皮细胞的损伤,氧自由基和脂质过氧化物能抑制前列环素的产生,促进血栓素A2(TXA2)和一氧化氮(NO)的释放。氧化应激与神经内分泌系统过度激活、内皮功能障碍等病理生理机制相互作用,共同促进疾病的发生、发展,通过多个途径诱发子痫前期。近年来,子痫前期发病的炎症机制再次受到重视,越来越多的学者认识到,子痫前期是母体对妊娠的一种过度性炎症反应,血管内皮细胞损伤是子痫前期患者白细胞、凝血系统和补体系统等多种因素共同参与的血管内过度性炎症反应的一部分。脂联素(adiponectin)作为一种炎性细胞因子与子痫前期的关系引起关注。脂联素作为一种新型脂源性激素,不仅参与调节内皮细胞炎症反应,而且参与脂质代谢和内皮细胞功能的病理生理过程,与炎症反应、胰岛素抵抗、动脉粥样硬化等均有密切关系。许多研究证实子痫前期存在明显的脂质代谢紊乱、胰岛素抵抗、动脉粥样硬化和内皮细胞功能障碍。瘦素(leptin)是脂肪细胞分泌的蛋白质类激素,它在人体内多种组织脏器中均有表达,通过与其受体结合发挥多种生物学效应。瘦素与子痫前期之间的关系已有较多报道,但结论分歧较大。越来越多的证据显示环氧合酶-2(cyclooxyygenase-2,COX-2)与炎症及动脉粥样硬化有关。研究还证实,子痫前期存在炎症和动脉粥样硬化。研究表明COX-1和COX-2在胎盘组织中均有表达,而且,在正常妊娠孕妇胎盘组织中COX-1和/或COX-2水平升高。然而,国外有关子痫前期孕妇胎盘组织中COX-1和COX-2水平或活性的研究,结论分歧较大,既有子痫前期孕妇胎盘组织中COX水平增加的报道,也有研究认为COX在子痫前期胎盘组织中的表达不变,还有学者的结论是降低。国内尚无子痫前期孕妇胎盘组织中COX-1和COX-2水平或活性的研究。我们推测,COX-2作为前列腺素生物合成的限速酶,可能在子痫前期发生和发展中起到重要作用,因而,COX-2在胎盘组织中的水平或活性是否升高值得研究。本课题采用分子生物学和免疫学实验技术检测正常妊娠和子痫前期患者血浆高敏C-反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症标志物和8-异前列腺素(8-isoprostane)、丙二醛(MDA)、氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)等氧化应激产物的浓度,以求进一步探讨氧化应激和炎症反应在子痫前期中的作用及其相互关系。同时测定血清脂联素和瘦素等脂源性细胞因子在子痫前期中的变化,探索脂源性细胞因子在子痫前期中的作用,为临床预防和治疗子痫前期提供理论依据。本课题还应用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptional-polymerase chain reaction, RT-PCR)法和免疫组织化学法分别检测子痫前期患者和正常孕妇胎盘组织中COX-2 mRNA和蛋白的表达,以期进一步探讨COX-2在子痫前期发病机制中的作用。本研究分为以下三部分,现分述如下:第一部分氧化应激和炎症反应在子痫前期中的作用及其相互关系目的通过测定子痫前期患者氧化应激产物和炎症标志物的水平,进一步研究子痫前期的发病机制。方法以53例子痫前期孕妇为研究组(其中轻度子痫前期32例、重度子痫前期21例),20例同期分娩的正常孕妇为对照组。检测血浆8-异前列腺素(8-isoprostane)、丙二醛(MDA)、氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)和高敏C-反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度。结果①子痫前期患者血浆8-isoprostane、MDA、ox-LDL分别为(153.07±44.84)pg/ml、(5.25±0.11)μmol/L、(772.04±151.00)μg/L均高于对照组[(82.86±20.91)pg/ml、(4.67±0.38)μmol/L、(431.45±200.69)μg/L,P<0.01、P>0.05和P<0.05];②子痫前期患者血浆hs-CRP、IL-6、TNF-α水平分别为(2.17±1.29)mg/L、(26.49±12.73)pg/ml、(18.47±4.17)pg/ml均明显高于对照组[(1.46±1.00)mg/L、(13.35±5.01)pg/ml、(8.86±1.39)pg/ml,P值均<0.01];③子痫前期患者8-isoprostane与hs-CRP、IL-6、TNF-α呈显著正相关,而MDA及ox-LDL均与hs-CRP、IL-6、TNF-α没有相关性。结论氧化应激及炎症反应可能在子痫前期中发挥重要的作用,干预氧化应激及炎症反应可能有利于控制子痫前期的发生和发展。第二部分脂源性细胞因子与子痫前期关系的研究目的探讨子痫前期患者血清脂源性细胞因子(脂联素、瘦素)水平的变化及其意义。方法以53例子痫前期孕妇为研究组(其中轻度子痫前期32例、重度子痫前期21例),20例同期分娩的正常孕妇为对照组。采用ELISA法检测血清脂联素和瘦素水平。同时检测血清甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。结果①轻度、重度子痫前期患者血清脂联素水平分别为(8.88±4.67)ng/ml及(5.14±2.79)ng/ml,明显低于对照组(11.61±2.90ng/ml),差异有统计学意义(P均<0.01)。而轻度、重度子痫前期患者血清瘦素水平为(21.79±15.19)ng/ml及(27.27±18.38)ng/ml,明显高于对照组(12.35±6.51ng/ml),差异有统计学意义(P<0.05, P<0.01)。②子痫前期患者血清脂联素与TG、TC、LDL-C、HDL-C均呈显著相关(r值分别为-0.658、-0.624、-0.419、0.461),瘦素水平也与上述指标呈显著相关(r值分别为0.534、0.707、0.418、-0.513)。③子痫前期患者血清脂联素及瘦素水平呈高度负相关(r=-0.760, P<0.01)。结论脂联素、瘦素等脂源性细胞因子在子痫前期的发病中可能发挥一定的作用。第三部分环氧合酶-2在子痫前期患者胎盘组织中的表达目的研究环氧合酶-2(cyclooxyygenase-2,COX-2)在子痫前期患者胎盘组织中的表达,探讨其在子痫前期发病机制中的作用。方法采用免疫组化SP法检测32例子痫前期患者(轻度18例,重度14例)及20例正常孕妇胎盘组织中COX-2的表达。应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测30例子痫前期患者及12例正常孕妇的胎盘组织中COX-2 mRNA的表达。结果(1) COX-2主要表达于胎盘血管内皮细胞。子痫前期孕妇及正常孕妇胎盘组织中COX-2蛋白的阳性表达率分别为65.5%和50.0%,差异无显著性(P>0.05)。(2)子痫前期组COX-2 mRNA表达水平为0.50±0.22,对照组为0.44±0.17,两组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论COX-2在子痫前期的作用尚难确定。