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桂枝甘草龙骨牡蛎汤颗粒是由桂枝、炙甘草、龙骨、煅牡蛎四味药组成，具有镇静安神，收敛固涩之功效，临床上用于治疗心阳虚所致的心悸、心烦、失眠、胸闷、身躁、乏力、精神萎靡见上述症候者。本课题为新药中药天然药物注册分类六类[1]，是以中医药理论为指导，应用现代制药技术和方法，对桂枝甘草龙骨牡蛎汤颗粒的药学及毒理进行了系统的实验研究，确保制备工艺科学合理，药品制剂安全有效、质量稳定可控。一、立题依据本方来源于《伤寒论》中的经方桂枝甘草龙骨牡蛎汤《伤寒论》118条：“火逆下之,因烧针烦躁者,桂枝甘草龙骨牡蛎汤主之。”桂枝一两(去皮),甘草二两(炙),牡蛎二两(熬),龙骨二两。上四味,以水五升,煮取二升半去滓。温服八合,日三服[2]。本方中桂枝温通心阳，和畅心气，炙甘草温补心气，与桂枝相用，温阳补阳；龙骨镇静安神，使神明内守，煅牡蛎潜镇浮阳之躁动，与龙骨合用潜镇安神[3～4]。国家食品药品监管局发布施行《中药注册管理补充规定》[5]，其规定项下第七条、第八条着重对中药复方制剂的分类进行了细化，增加了“来源于古代经典名方的中药复方制剂”和“主治为证候的中药复方制剂”两个类别，突出中医药特色、继承传统的思想。二、制备工艺的研究水提取工艺：采用正交试验法优选最佳提取工艺条件。结果水提取工艺条件为：加入10倍加水量，提取三次，每次提取两小时。水提液浓缩工艺：以物料干燥情况为评价指标，考察了浓缩温度、浓缩程度。结果：水提液在80℃以下减压浓缩，至相对密度1.18～1.23（60℃）之间即可。制剂成型工艺：通过对比试验考察了不同稀释剂及用量对制粒情况影响，并考察了颗粒的堆密度、临界相对湿度、休止角情况影响。结果：清膏相对密度在1.18～1.23（60℃）之间，用清膏-辅料（1：2）的比例加入糊精，将二者混匀，制粒，干燥，整粒，即得。三、质量标准研究TLC定性研究：采用TLC法对桂枝甘草龙骨牡蛎汤颗粒中所含桂枝、炙甘草2味药材进行了鉴别。试验结果表明，供试品色谱中，在对照药材或对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，而阴性对照在相应位置无干扰。且经多次试验，重现性良好。HPLC含量测定研究：采用HPLC法测定了桂枝甘草龙骨牡蛎汤颗粒中甘草苷含量，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05%磷酸溶液（三乙胺调Ph至5.0）(18:82)为流动相；检测波长为277nm。理论板数按甘草苷峰计算应不低于5000。并进行了方法学考察，结果表明该方法合理可行，重现性好，可用于桂枝甘草龙骨牡蛎汤颗粒的质量控制。本品每克含炙甘草以甘草苷计不得低于1.20mg。四、药物稳定性研究本品在加速试验条件和室温条件下观察6个月，各项指标均符合规定，各批加速稳定性和长期稳定性炙甘草甘草苷含量RSD小于1.0%，质量检测结果稳定，长期稳定性试验9、12、18、24个月继续观察中。本品以药用复合膜为内包材，结果表明使用此包装材料具有合理性；根据稳定性研究结果，初步拟定本品有效期为24个月。五、毒理研究通过灌胃给予大鼠90天桂枝甘草龙骨牡蛎汤颗粒，研究本品所产生的长期毒性反应及其程度。应用SPF级SD大鼠120只，雌雄各半，随机分为4组，每组30只进行试验。分组设高（5.85g浸膏/kg），中(2.93g浸膏/kg)，低（1.46g浸膏/Kg）（分别相当于人临床拟用量的60、30和15倍)三个剂量组和空白对照组。大鼠灌胃给药，每天给药一次，连续90天。每周记录动物体重及摄食量。给药结束后，每组处死20只动物，进行脏器系数、血液学指标、血清生化学、血清电解质；每组剩余10只动物停药30天作恢复期观察及检查。结果整个试验期间大鼠整体状况较好，体重正常增加，体重和摄食量各剂量组与对照组比较差异无显著意义；脏器系数各剂量组与对照组比较差异无显著意义；血液学指标、血清生化学、血清电解质各剂量组与对照组比较差异也无显著意义；组织病理学检查未发现各脏器组织学变化。结论：桂枝甘草龙骨牡蛎汤颗粒大鼠90天长期毒性试验对大鼠无毒性损伤及延迟性毒性反应。