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呼肠孤病毒3型(reovirus type 3，Reo-3)属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)、正呼肠孤病毒属(Orthoreovims)、双链RNA病毒。呼肠孤病毒3型是实验动物SPF级大鼠、小鼠、豚鼠、地鼠的必须检测项目。其自然感染宿主比较广泛，如人类、小鼠、大鼠、猴、牛等，可隐性感染动物并在体内产生抗体，给血液制品、单克隆抗体、细胞培养等外来致病因子的检定及动物试验带来一定的困难［4］。因此建立快速诊断方法十分必要。
目前，检测呼肠孤病毒3型主要用酶联免疫吸附法(ELISA)检测，其抗原获得方法主要为细胞培养，但很难获得高滴度的病毒；病毒虽可在鸡胚内增殖，但没有规律性［5］。本研究利用大肠杆菌表达系统pQE31表达呼肠孤病毒δ1蛋白抗原部分，用纯化的融合蛋白作为包被抗原建立ELISA方法，可用于呼肠孤病毒血清抗体的检测。
用生物学软件DNAstar分析δl蛋白，根据GenBank中报道的Reo-3 S1基因序列(gi:61780)设计特异性引物，用一步法RT-PCR方法扩增S1基因的主要抗原片段SR，将其插入到pMDl8-T载体中，酶切鉴定后测序。将阳性重组质粒用Sph I+Sal I双酶切后连接到同样双酶切的表达载体pQE-31上，转化Ecoli M15(pREP-4)，IPTG诱导表达。对表达蛋白进行SDS-PAGE电泳和Westem-blot的结果表明，SR基因在E.coli M15中获得表达，表达蛋白SR-δ1分子质量约为32 kD，与预期大小相符，能与Reo-3阳性血清发生特异性反应，说明SR-δl有很高的抗原性。
把表达的SR-δl重组蛋白经初步纯化后用作包被抗原，建立了检测Reo-3血清抗体的间接EIASA方法，并确定了最适抗原包被浓度(0.61μg/mL最适血清稀释度(1:100)、血清最适作用时间(150 min)、最适封闭液(8％脱脂奶粉)、最适封闭时间(45min)、酶标抗体最适稀释度(1:8000)、酶标二抗最适作用时间(60min)、底物最适显色时间(10 min)和判定界值(0.292)。包被的重组抗原不与EcT(鼠痘病毒)、SeV(仙台病毒)、MHV(小鼠肝炎病毒)、PVM(小鼠肺炎病毒)阳性血清发生交叉反应，表明建立的ELISA诊断方法具有良好的特异性。批内重复试验和批间重复试验变异系数均小于10％，说明该方法具有很好的重复性。该诊断方法与国家实验动物检测中心建立的ELISA检测试剂盒比较，特异性、敏感性和符合率分别为98.5％、100％和98.7％。上述结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性，显示了良好的应用前景。本研究成功克隆了Reo-3 S1基因，进行了表达。利用表达的SR-δl蛋白成功建立了快速简便的ELISA诊断方法，为实验动物的质量控制、开发商品化试剂盒提供了技术支持。