论文部分内容阅读
缺血性脑血管病为临床常见病和多发病，因其具有较高发病率、死亡率和致残率，给个人、家庭和乃至整个社会带来了巨大的精神压力和经济负担。针灸作为我国传统医学最要组成部分，治疗脑血管病已有数千年历史。现代电针是在传统针灸的基础上逐渐发展起来，有着刺激量客观、稳定且病人容易耐受等独特的优越性，在临床上广泛应用于治疗脑卒中后遗症，能有效改善患者肢体神经功能评分。电针也可抑制局灶脑缺血/再灌注时缺血神经元的凋亡，上调缺血区血管内皮生长因子表达、进而促进血管新生和抑制炎症反应，从而实现脑保护。电针通过体表穴位有效刺激激活体内保护机制，是治疗脑缺血的一种有效以及理想的非药物手段。它的作用机理是否与激活局灶脑缺血/再灌注后内源性血管生成机制中血管发生有关？这值得我们进一步探索。有研究发现，脑缺血后的血管发生与内皮祖细胞（EPCs）密切相关。在脑缺血后血管再生机制的研究中，关于电针促进脑缺血后EPCs动员、迁移和归巢形成新生血管的机制研究较少。本实验致力于研究在电针干预下局灶脑缺血/再灌注SD（Sprague-Dawley）大鼠外周血基质细胞衍生因子-1α（SDF-1α）、趋化因子受体4（+CXCR4）细胞和EPCs与骨髓EPCs数量的变化规律，探讨电针在局灶脑缺血/再灌注后对SDF-1α和EPCs的作用，从SDF-1/CXCR4轴的角度探讨电针对EPCs迁移的影响。目的1.探讨在电针干预下大鼠局灶脑缺血/再灌注后，大鼠的学习记忆能力；2.探讨在电针及AMD3100干预下大鼠局灶脑缺血/再灌注后，CXCR4+细胞在外周血，EPCs在外周血和骨髓的数量变化；3.探讨在电针大鼠局灶脑缺血/再灌注后，SDF-1α在外周血浓度变化；4.探讨电针促进大鼠局灶脑缺血/再灌注后血管新生的机制。方法采用线栓大脑中动脉法制备局灶脑缺血/再灌注模型（MCAO/R模型），96只雄性SD大鼠，分为A和B两个大组，再将A组分为正常组（normal组）、模型组（model组）和电针组（EA组）共16只SD大鼠（n=6），B组分为正常组（normal组）、模型组（model组）、电针组（EA组）和药物组（AMD3100组）共78只SD大鼠（n=6）。电针组大鼠为再灌注后1h刺激大鼠双侧“合谷”穴（LI4），刺激时间15min，每日1次。药物组大鼠为再灌注后1h以1.25mg/kg腹腔注射AMD31001次。A组中模型组和电针组在再灌注后第3d进行水迷宫试验，检测大鼠的学习记忆能力。B组大鼠再按局灶脑缺血2h再灌注后的观察时间点，将模型组电针组和药物分为1d、2d、3d和7d各4个亚组，每个时间点6只SD大鼠，除药物组外均采用流式细胞术检测外周血EPCs、CXCR4+细胞和骨髓EPCs占单核细胞的百分比，ELISA法检测血清中SDF-1α蛋白浓度。药物组只检测外周EPCs、CXCR4+细胞单核细胞的百分比。神经症状学评分了解局灶脑缺血/再灌注后各组大鼠神经功能缺损情况。结果1．神经症状学评分局灶脑缺血/再灌注大鼠再灌注后均出现不同程度的神经功能缺损，电针可有效改善神经症状学评分。再灌注2h、1d和3d评分略有逐渐减少趋势，但模型组与电针组比较差异无显著性（P>0.05）；随着缺血再灌注时间延长，大鼠神经功能有所恢复，再灌注7d两组比较有显著差异（P<0.05）。2．水迷宫试验（1）定位航行试验平均潜伏期：每组大鼠的逃避潜伏期时间均随训练次数的增加而缩短。在水迷宫定位航行试验第1d（再灌注后的第3d），正常组和模型组分别与电针组比较差异无显著性（P>0.05）。第2d电针组与正常组比较差异，差异不具有统计学意义（P>0.05）；第3d时模型组、电针组分别与正常组比较，具有统计学意义（P<0.05）；第4d电针组分别较正常组和模型组比较，差异均具有统计学意义（P<0.05）。但第5d电针组逃避潜伏期时间与正常组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。（2）空间探索实验原平台游泳时间：在第6的拆除平台后，正常组和电针组较模型组在原平台象限游泳时间明显延长，差异具有统计学意义（P<0.05）。正常组和电针组之间比较，差异无显著性（P>0.05）。穿过平台次数：正常组和电针组较模型组穿台次数明显增多，正常组较模型组比较差异具有统计学意义（P<0.05）；正常组和电针组之间比较无明显差异，无统计学有意义（P>0.05）。3．检测大鼠外周血EPCs、CXCR4+细胞数量和骨髓EPCs数量以及外周血SDF-1α蛋白含量的试验（1）外周血EPCs变化第1d模型组和电针组较正常组外周血EPCs数量较正常组显著增高（P<0.01），第2d电针组高于模型组（P<0.05）；第3d和7d模型组与电针组外周血EPCs数量均略高于正常组，但各组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。各时间点药物组与正常外周血EPCs数量无显著差异（P>0.05）。（2）外周血CXCR4+细胞变化第1d模型组和电针组分别较正常组和药物CXCR4+细胞数量均显著增高（P<0.01）；第2d电针组增至最高，且明显高于模型组（P<0.05）；第3d电针组仍明显高于其他组（P<0.05）；第7d电针组和模型组外周血CXCR4+细胞数量高于正常组，差异有统计学（P<0.05）；各时间点药物组与正常外周血CXCR4+细胞数量无显著差异。（2）外周血SDF-1α蛋白浓度变化第1d模型组和电针组外周血清SDF-1α蛋白浓度均增至最高，较正常组差异具有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。第2d模型组和电针组外周血SDF-1α蛋白浓度均较第1d下降，电针组与正常组比较差异仍然具有显著性（P<0.01）；第3d模型组和电针组间外周血SDF-1α蛋白浓度的差异无统计学意义（P>0.05），但两组均高于正常组，差异具有统计学意义（P<0.05）；第7d各组间外周血SDF-1α蛋白浓度差异无统计学意义（P>0.05）。（3）骨髓EPCs变化第1d模型组骨髓EPCs数量增至最高，较正常组增高明显（P<0.01）；第2d电针组骨髓EPCs数量显著高于正常组和模型组（P<0.05，P<0.01）；第3d电针组较正常组差异有统计学意义（P<0.01）；第7d各组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论1．电针可能改善局灶脑缺血/再灌注大鼠神经功能缺损，促进再灌注中后期肢体功能恢复；2．电针可能改善局灶脑缺血/再灌注大鼠学习记忆能力；3．电针可能促进局灶脑缺血/再灌注大鼠外周血EPCs和CXCR4+细胞数量增加；4．电针可能促进局灶脑缺血/再灌注大鼠骨髓EPCs数量增加；5．电针可能促进局灶脑缺血/再灌注大鼠外周血SDF-1α蛋白表达上调；6．电针可能促进局灶脑缺血/再灌注大鼠外周血和骨髓EPCs数量的增加，该作用可能与SDF-1α表达上调相关。