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第一部分:鼓室内注射庆大霉素在内耳的分布 一、鼓室内庆大霉素一次注射在内耳细胞的分布 目的:将庆大霉素同Texas Red连接形成gentamicin-conjugated Texas Red,即GTTR后,行豚鼠鼓室内注射GTTR,观察其在内耳的分布,比较一次鼓室内注射GTTR后,不同时间庆大霉素在前庭和耳蜗的分布情况。 方法:研究对象为豚鼠,行鼓室内GTTR注射一次,在注射后12h、24h、48h、3d、4d、7d、14d、28d处死动物,Phalloidin染色后运用激光共聚焦扫描显微镜观察基底膜、椭圆囊、球囊、外半规管壶腹嵴、血管纹庆大霉素分布情况,并进行荧光分布半定量分析。 结果:庆大霉素早期在内耳所有细胞均见分布,在基底膜的外毛细胞、椭圆囊、球囊、外半规管壶腹嵴的感觉细胞聚集明显,主要聚集在毛细胞顶端纤毛下方的细胞浆中,支持细胞分布较少。在注射后第3天庆大霉素在内耳聚集达到最高峰,并在细胞内聚集较长时间,对临床治疗有指导意义。 结论:GTTR是一个研究庆大霉素在内耳分布的良好的荧光探针,可用来检测庆大霉素的药代动力学和聚集机制。 二、不同方案鼓室内庆大霉素注射在内耳各细胞的分布的比较 目的:观察和比较豚鼠不同方案鼓室内注射GTTR后,庆大霉素在前庭和耳蜗的分布情况。 方法:A组鼓室内注射GTTR一次,14天后观察,B组鼓室内注射GTTR一次,28天后观察;C组鼓室内注射GTTR每天一次,连续四天,第一次注射后28天后观察;D组鼓室内注射GTTR每周一次,连续四周,第一次注射后28天后观察,Phalloidin染色后运用激光共聚焦扫描显微镜进行基底膜、椭圆囊、球囊、外半规管壶腹嵴扫描,观察GTTR荧光分布情况,并进行荧光半定量分析,比较各组荧光分布的差异。 结果:一次注射后,GTTR在注射后14天和28天在外毛细胞和、椭圆囊、球囊、外半规管壶腹嵴仍有较明显的聚集。每天一次,连续四天与每周一次,连续四周有非常明显的GTTR聚集。聚集主要在耳蜗的外毛细胞和前庭的感觉细胞。而在支持细胞未见明显累积。 结论:庆大霉素鼓室内注射后,在内耳聚集的时间较长,反复注射有累积效