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日本五针松(Pinus parviflora Sieb.et Zucc.)为松科常绿乔木,树形挺拔秀丽,是观赏价值很高的园林绿化与盆景制作树种,目前主要采用播种或嫁接方法进行繁殖。本文针对日本五针松无性繁殖难的问题,以其针叶为外植体,进行胚性愈伤组织的诱导,探讨了影响胚性愈伤发生的主要因素及生理生化变化,同时利用扫描电镜和光学显微镜对诱导过程中细胞形态变化进行了观察,为日本五针松植株再生体系建立奠定实验基础。主要研究结果如下: 1.针叶愈伤组织诱导最佳培养基为DCR+5 mg/L2,4-D+0.5 mg/L6-BA。影响愈伤组织增殖的因素依次是蔗糖>水解酪蛋白>肌醇,极差分析和方差分析结果表明,最佳的搭配是3%蔗糖+300 mg/L水解酪蛋白+600 mg/L肌醇。 2.上述愈伤组织经适宜的诱导可获得胚性愈伤组织,胚性愈伤诱导最佳的培养基是DCR+0.6 mg/L TDZ+1.0 mg/L复硝酚钠+1.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L IBA。 3.测定了非胚性愈伤和胚性愈伤在培养过程中可溶性蛋白、可溶性糖和淀粉含量变化。随着培养时间的增加,胚性愈伤的可溶性蛋白在第40 d达到峰值(4.5907 mg/g),非胚性愈伤在第30d达到最大值(1.7391 mg/g)。可溶性糖含量也出现了峰值,胚性愈伤在第40 d达到最大值(32.3576 mg/g),非胚性愈伤在第30d出现了峰值(30.1975 mg/g)。胚性愈伤组织的淀粉含量在第30d达到了最大值(16.5875 mg/g),非胚性愈伤组织的淀粉含量一直呈下降趋势,从6.3214 mg/g(20 d)下降到降到1.2453 mg/g(50 d),其结果表明胚性愈伤的代谢活性高于非胚性愈伤。 4.测定了胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织中的SOD、CAT和POD活性随着时间变化的趋势。两种组织中的SOD活性均在第30d达到了最大值(胚性142.5257 U/g,非胚性40.7645 U/g)。胚性愈伤的CAT活性在第30 d达到了最大值19.4126 U/(g·min),非胚性愈伤的CAT活性从20 d到50 d一直呈下降趋势。两种愈伤组织的POD活性均在第40 d达到最大值,分别是120.3257 U/(g·min)和17.7431 U/(g·min),而且胚性愈伤的POD活性一直高于非胚性愈伤。SOD、CAT和POD活性表明胚性愈伤的适应性、抗逆性均强于非胚性愈伤。 5.胚性愈伤的细胞结合紧密,形成了胚性细胞团,其主要是由圆形的胚性细胞(embryogenic cell)和长柄状的胚柄细胞(suspensor-like cell)组成。非胚性愈伤的细胞呈圆形和细长形两种,不形成细胞团结构。