【摘 要】
：
该研究通过对苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)伴孢晶体中20-kb DNA上含有的cry1Ac基因进行克隆和表达,发现20-kb DNA上存在晶体蛋白基因的全长编码序列.为了
论文部分内容阅读
该研究通过对苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)伴孢晶体中20-kb DNA上含有的cry1Ac基因进行克隆和表达,发现20-kb DNA上存在晶体蛋白基因的全长编码序列.为了进一步分析含有cry基因的20-kb DNA片段的来源,该研究利用PCR和Southern杂交技术对Bt 4.071 8菌株的质粒与染色体上cry基因的分布情况进行检测,发现质粒和染色体上的部分DNA序列与伴孢晶体中20-kb DNA的核酸序列具有很大的相关性,它们均含有cry基因,而且所含cry基因的类型也一致,这为证明Bt中的20-kb DNA来源于质粒或染色体提供了直接的序列依据.1.Bt4.071 8菌株伴孢晶体中20kb DNA上cry1Ac基因的克隆和表达 根据GenBank中cry1Ac基因的核酸序列设计引物,以Bt 4.0718菌株伴孢晶体中的20-kb DNA为模板,扩增含有上游启动序列和下游终止序列的全长cry1Ac基因,将其与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5 α,获得重组菌株DH5 α/pTAc4.对重组质粒pTAc4进行BamHI/SalⅠ双酶切,然后将含有cry1Ac基因的4.2kb的酶切片段克隆到Bt-E.coli穿梭载体pHT304中,得到重组质粒pHAc4.2.Bt4.071 8菌株中cry基因的定位 提取Bt 4.0718菌株的质粒,同时采用脉冲电泳分离该菌株染色体的酶切片段,并将凝胶中的质粒DNA和染色体酶切片段分别转移至Hybond-N<+>尼龙膜上.利用地高辛对cry1Ac基因保守区段的1.6kb PCR产物进行标记,以此为探针分别与质粒和染色体的酶切片段进行Southern杂交.杂交结果显示在Bt 4.0718的质粒和染色体均存在cry基因.3.Bt 4.071 8菌株染色体上cry基因的鉴定 采用脉冲电泳分离Bt 4.0718菌株的染色体,将染色体DNA带从凝胶上切下,利用透析袋电洗脱法回收染色体DNA,经SalⅠ酶切后作为模板,进行PCR扩增.
其他文献
目的:建立超高效液相色谱(UPLC)法同时测定五味沙棘散中7个成分含量的方法.方法:色谱柱为AQUITY UPLCBEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm),以乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)为流动
目的:测定傣百解中铅(Pb)、镉(Cd)、砷(As)、汞(Hg)、铜(Cu)含量,并对结果进行分析评价.方法:采用微波消解法进行样品前处理,用电感耦合等离子质谱法(ICP-MS)检测重金属含量,
目的:对国内不同厂家生产的胃膜素胶囊的质量进行对比分析.方法:依据现行法定质量标准,对8个厂家80批胃膜素胶囊进行标准检验,分析胃膜素胶囊质量的总体水平,比较不同企业产
目的:建立HPLC梯度洗脱法同时测定固肾安胎丸中2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷、川续断皂苷Ⅵ、续断苷A和续断苷B含量.方法
通过观察细胞周期和凋亡相关因子pRb和E2F-1的变化,探讨褪黑素(melatonin,MLT)阻滞H22肝癌细胞周期、诱导细胞凋亡的机制,为临床应用褪黑素预防和治疗人类肿瘤提供理论依据.
目的:建立一种用于快速检测中药材、中成药及保健品中非法添加的14种黄色系、橙色系、红色系染色物的超高效液相色谱(UPLC)及液相色谱-质谱(LC-MS)方法,并用于根痛平胶囊的筛
党史人物的革命历程及生平事件是我国近代历史的重要组成部分,是人民群众宝贵的精神财富,是进行革命传统教育、爱国主义教育的良好教材,因此,撰写党史人物材料意义重大。而要
目的:建立注射用醋酸卡泊芬净的有关物质测定方法,并用该方法对样品进行质量控制.方法:采用HPLC法,色谱柱:YMC Hydrosphere C18(150 mm×4.6 mm,3μm);流动相A:高氯酸与氯化
目的:考察氯己定碘溶液剂的抗菌效果.方法:采用常量肉汤稀释法确定氯己定碘溶液剂的最小抑菌浓度,并进行现场消毒验证.结果:氯己定碘溶液剂对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白
介绍一种车床或武加上刻度环的句号装置、设计制造、使用方法、主意事项．成装置具有结构简单、制造容易，使用方便的特点。
Introducing a lathe or Wu plus the tick ring dev