【摘 要】
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琼胶酶是一类能降解琼胶多糖的酶,其降解产物具有多种生理活性功能。本文报道了从连云港台南盐场中分离出一株琼胶降解细菌,并进行了分子鉴定,分析了其生长、产酶特性,初步研究了
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琼胶酶是一类能降解琼胶多糖的酶,其降解产物具有多种生理活性功能。本文报道了从连云港台南盐场中分离出一株琼胶降解细菌,并进行了分子鉴定,分析了其生长、产酶特性,初步研究了影响该酶活性的因素,并且进行了琼胶酶的分离纯化。实验内容与主要结论概述如下:
(1)细菌呈长杆状,革兰氏阴性,无芽孢。菌落圆形,乳白色。菌株在生长时,会使菌落周围的琼脂培养基形成釜底型凹陷。经16SrRNA序列分析鉴定,该细菌属于海杆菌属(Marinobacter)。
(2)研究不同因素对细菌生长和产酶的影响。发现该细菌能在1%-15%的NaCl浓度下生长,属于中度嗜盐细菌,最适生长和产酶盐度为8%NaCl浓度,最适生长和产酶pH为8.0,最适生长和产酶温度为35℃。
(3)研究该细菌胞外琼胶酶的基本酶学性质。用饱和度80%的硫酸铵盐析法提取粗酶,用离子交换柱层析和凝胶柱层析纯化,经SDS~PAGE测定该细菌所产生的琼胶酶的分子量为42KDa。该细菌琼胶酶最适反应温度为40℃,最适反应pH值为7.0,最适反应底物质量百分数为0.15%,最适反应NaCl浓度为6%,Ca2+,Cu2+对酶活力有较强的促进作用,Pb2+、Mn2+对酶活力有较强的抑制作用。该琼胶酶具有很好的热稳定性,100℃水浴里保温20min也不能使其完全失活。
从连云港台南盐场采集藻垫,在去除底泥等杂物的藻类层中分离出五株不同的细菌(编号为A、B、C、D和E)。经VITEK32鉴定,A和B可能是鲁氏不动杆菌(Acinetobacter lwoffii)或琼氏不动杆菌(Acinetobacter junii),C为溶血巴斯德菌(Pasteurella haemolytica),D为尿素放线杆菌(Actinobacillus ureae),E未鉴定出结果。在所试验的盐度范围内,细菌A、B和C的最适生长盐度都为2.5%,细菌D的最适生长盐度为5.0%-10.0%,细菌E的最适生长盐度为2.5%-5.0%。细菌A、B、C、D和E细菌胞外多糖产率分别为0.628、0.362、0.177、0.269和0.719 g/g细胞干重。细菌A、B、C、D和E胞外多糖的糖醛酸含量分别为5.4%、9.9%、7.4%、9.8%和23.4%,均不含蛋白质,均无乳化、絮凝及凝胶活性。实验结果显示细菌胞外多糖是构成盐田藻垫胶质的重要组成部分,但从其物化性质看,细菌胞外多糖对藻垫的胶结和粘附性没有直接的影响。
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