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金和银两种金属物质，在很久以前就被大家广为熟知和使用。人类使用金和银这两种金属的历史已经非常悠久，可以追溯至很久以前，比如使用的金首饰和银器具等。然而，随着纳米科学技术的不断发展，金和银开始作为一种纳米材料被人们所熟知和使用，人类也在日常生活和越来越多的领域使用到金银纳米材料。因此，人类在广泛深入使用纳米材料之前，要对纳米材料可能产生的毒理性进行一定的研究。同时，纳米材料在微量水平的量化也是研究的一方面。现在已经有一些手段对纳米材料进行大小、形态和结构的表征，然而纳米粒子的定量分析还仍然是一项非常具有挑战性的工作。现有的很多方法都过于局限，还没有有效的方法可以进行很好的量化。 基于抗原抗体的特异性进行定量检测的酶联免疫分析方法是一种比较传统的分析方法。本实验室，不仅可以通过免疫新西兰大白兔制备出高特异性的多克隆抗体，同时也可以建立不同的免疫方法来对样品进行量化。因此在现有的条件下，建立了相应的免疫分析方法对纳米粒子进行定量检测。首先，通过对新西兰大白兔进行免疫制备特异性高的抗纳米粒子的多克隆抗体，随后建立直接竞争酶联免疫分析方法和间接竞争酶联免疫分析方法来对纳米材料进行定量检测。为纳米材料的定量检测提供了一种简便、灵敏、特异性高的分析方法。本论文所做具体工作如下： 1.成功合成了不同尺寸的纳米金粒子 将适量氯金酸HAuCl4加入蒸馏水中，经煮沸后加入不同体积的柠檬酸钠溶液，制备得到了16nm，40nm和80nm等不同尺寸的纳米金粒子。经扫描电镜和透射电镜进行了结构表征。 2.制备不同尺寸的纳米金粒子的抗体 16nm，40nm和80nm等不同尺寸的纳米金颗粒用修饰剂巯基乙酸（TGA）和活化剂1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）（NHS）碳二亚胺盐酸盐（EDC）修饰后连接牛血清白蛋白BSA，得到大分子结合物AuNPs-BSA。用其作为免疫原免疫多组别的新西兰大白兔，分别得到抗血清效价达到1/64000的抗不同尺寸纳米金的多克隆抗体。 3.建立直接竞争酶联免疫分析法测定50nm银纳米粒子 抗AgNPs抗体标记上HRP蛋白酶，与包被抗原AgNPs-OVA发生抗原抗体反应，建立了直接竞争酶联免疫分析法。优化了实验条件，检测限为0.0093 ng/mL，线性范围为10-3–1000 ng/mL，样品的加标回收率为73.0-127.9％，相似物的交叉反应率也低于10％。实验结果证明我们成功地定量检测了50nm AgNPs，该方法简便、灵敏、特异性强。 4.建立间接竞争酶联免疫分析法测定40nm金纳米粒子 对制备的抗40nm AuNPs抗体，本实验建立了间接竞争酶联免疫分析法来进行定量。用上述制备的抗40nm AuNPs抗体，在最优条件下，使得抗原抗体发生特异性反应。线性范围为10-2–10000 ng/mL(R2=0.98174)，检测限为0.038 ng/mL，交叉反应率也低于10％，回收率在75.78-139.06％。实验结果表明我们可以成功地痕量纳米金颗粒。 5.建立直接竞争酶联免疫分析法测定40nm金纳米粒子 此实验中，我们对实验条件进行了优化并绘制了标准曲线。线性范围为0.001-1000 ng/mL，检测限(LOD)为0.0107 ng/mL。样品回收率为88％-124％，几种类似物的交叉反应率都低于6％，说明制备的多克隆抗体的特异性较好，实验结果令人满意。 6.不同尺寸纳米金生物学效应研究 本实验,我们主要研究了不同尺寸纳米金对新西兰大白兔肝脏的影响。采用免疫组化SABC染色法研究血清谷草转氨酶（GOT2）阳性细胞在新西兰大白兔发育中的表达，最后用光学显微镜进行切片观察。实验结果表明纳米材料进入动物体内会产生一定的危害，粒径越小的纳米材料毒性越大，粒径较大的纳米材料几乎无毒。