论文部分内容阅读
目的：采用基因芯片技术比较筛选前的小鼠组织细胞肉瘤L-Ⅱ与筛选后的具有高转移能力的第9代转移瘤细胞之间的基因表达谱，利用生物信息学方法筛选出与淋巴瘤侵袭和转移相关的差异基因。
方法：L-Ⅱ瘤细胞接种小鼠胁部皮下，取其肺转移灶制成细胞悬液接种另一小鼠体内，再取其肺转移灶继续传代。对筛选前的L-Ⅱ瘤株和筛选后的第9 代瘤株的细胞形态、生存时间、肿瘤生长曲线、免疫组化的差异进行了比较。再分别提取筛选前后瘤细胞的mRNA，通过逆转录将细胞cDNA 进行生物素标记，用美国Superarray 公司的含113 个目的基因的肿瘤转移基因芯片杂交, GEArray 软件对结果进行分析，筛选出传代前后表达有差异的基因。对部分有差异表达的基因用RT-PCR 和Western blot 进行分析鉴定。
结果：用体内转移灶连续传代法筛选小鼠组织细胞肉瘤L-Ⅱ至第9 代。形态学观察: 光镜下筛选前后瘤细胞形态结构基本一致，细胞呈弥漫分布，细胞圆形至多边形，大小不等，核圆形、梭形或不规则形，嗜碱性增强，核浆比例增大，核分裂像较多，可见病理性核分裂像。生物学特性观察：小鼠荷瘤生存时间显示筛选前的L-Ⅱ瘤株为29.23±2.90 天，筛选后的第9 代瘤株为23.66±2.97 天，P﹤0.05，两者差别有显著性。肿瘤生长曲线：结果显示筛选后的第9 代瘤株生长速度快于筛选前的瘤株。免疫组化：筛选后的第9 代瘤株IGF-1、MMP-10 表达均较筛选前的L-Ⅱ瘤株增强。用肿瘤转移基因芯片杂交筛选出传代前后L-Ⅱ瘤细胞的差异表达基因共21 个，涉及肿瘤转移发生发展的各个方面，其中上调基因17 个,下调基因4 个。其中：细胞黏附相关基因2 个、基质金属蛋白酶2 个、调节细胞周期基因3 个、细胞生长与增殖基因5 个、凋亡相关基因1 个、转录调控基因2 个、其他6 个。选择其中有代表意义的4 个基因利用RT-PCR 和Westernblot 进行验证，结果证实所选基因在筛选前后瘤细胞中均有差异表达，与基因芯片的表达情况一致，说明基因芯片结果可信度较高。
结论：
1.成功筛选出L-Ⅱ高侵袭转移瘤株，筛选后的第9 代瘤株具有更强的侵袭转移能力。
2.小鼠组织细胞肉瘤L-Ⅱ的侵袭转移是一个涉及Kras-2、IGF-1、MMP-10、MMP-13、Brms-1 等重要转移基因和其他相关基因等多个基因共同参与的复杂过程。