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目的：建立高脂饮食NASH动物模型；观察清肝化痰活血方对MASH的防治作用；并从SREBP-1c、PPAR-α基因表达及脂质代谢、脂肪酸氧化等方面探讨药物的作用机制。
方法：采用高脂饮食NASH大鼠模型,实验分预防阶段(第12周)和治疗阶段(第17周),每阶段动物均随机分为四组：正常组、模型组、胆宁片组(简称胆宁组)和清肝化痰活血方组(简称清肝组)。清肝化痰活血方按1.85g·100g-1·d-1灌胃；胆宁片混悬液按1.03g·100g-1·d-1灌胃；正常组、模型组予生理盐水1ml·100g-1·d-1灌胃。第12周和第17周时处死动物,获取血清及肝组织标本,检测大鼠血清ALT、AST、GGT、TC、TG、FFA、SOD,肝组织中TG、FFA和MDA、TNF-a的含量或活性；应用HE染色法光镜下观察肝组织病理形态学改变；实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法测定肝组织PPAR-α和SREBP-1c mRNA表达。实验数据采用SPSS 11.5软件统计分析,根据资料的性质不同,分别采用T检验、单因素方差分析、X2检验和Ridit分析等。
结果：
1.12周时,与正常组相比模型组大鼠体重与肝指数明显增加,血清ALT、AST、GGT,TC、TG、FFA、肝组织TG、FFA和MDA含量或活性显著升高(P<0.05～0.001),血清SOD显著下降(P<0.01),负责脂质合成基因组的SREBP-1c mRNA表达明显增高(P<0.01),负责脂肪酸氧化基因组的PPAR-α明显减少(P<0.01);清肝预防组各项生化指标与模型组比较明显下降(P<0.05～0.01),血清SOD显著升高(P<0.05),SREBP-1c mRNA显著下降(P<0.05),PPAR-α明显增高(P<0.05),与正常组比较部分指标无显著性差异；胆宁预防组各项指标较模型组有所下降,血清SOD有所升高,但与清肝组比较仍有差异(P<0.05～0.01)。
2.12周后恢复普通饲料,第17周时模型对照组血清ALT、AST、GGT,TC、TG、FFA、肝组织TG、FFA、MDA和TNF-a含量或活性各项指标较12周时有所下降,但仍明显高于正常组(P<0.01～0.001),血清SOD较正常组显著下降(P<0.01),SREBP-1c mRNA表达明显增高(P<0.01),PPAR-α明显减少(P<0.01);清肝治疗组血清ALT、AST、GGT,TC、TG、FFA、肝组织TG、FFA、MDA和TNF-a与模型组比较明显下降(P<0.05～0.01),血清SOD显著升高(P<0.05),SREBP-1c mRNA显著下降(P<0.05),PPAR-α明显增高(P<0.05),与正常组
比较多数指标无显著性差异；胆宁治疗组其各项指标较模型组有所好转,但不及清肝治疗组,与清肝治疗组比较仍有统计学意义(P<0.05～0.01)。
3.光镜下观察模型组所有动物均出现程度不等的弥漫性肝细胞脂肪变性,其病理改变包括肝细胞气球样变,肝小叶内的炎症,不典型的Malloy小体,以及汇管区变性及点状或片状坏死,炎症细胞浸润以单核细胞、淋巴细胞为主,个别汇管区有纤维组织增生。与模型组比较清肝组脂肪变性的程度和炎症明显改善,且好于胆宁组。
结论：
1、血清、肝组织各项指标及肝组织形态学的变化证实：持续12周高脂饮食喂养复制NASH模型是一种成功率高的造模方法。
2、高脂饮食模型大鼠血清TG、TC、FFA、TNF-a明显增加,肝组织中TG、FFA和MDA明显增加,SOD明显减少,负责脂质合成基因组的SREBP-1c mRNA表达明显增高,负责脂肪酸氧化基因组的PPAR-α明显减少,表明脂质代谢紊乱、脂肪酸氧化异常、游离脂肪酸增加和脂质过氧化在NASH的发病机制中起着重要的作用。
3、清肝化痰活血方能明显降低NASH模型大鼠的体重和肝指数,改善和恢复肝组织损伤,减少血清TG、TC、FFA和TNF-a含量,减少肝组织中TG、FFA和MDA含量,提高肝组织SOD水平,抑制SREBP-1c表达,激活了PPAR-α的表达,显著改善脂肪变性程度和炎症活动度计分,表明本方具有良好的抗脂肪变性和保护肝细胞的作用。
4、清肝化痰活血方防治非酒精性脂肪性肝炎的作用机制可能为：
(1)抑制调控脂质合成基因组的SREBP-1c表达,减少肝组织中甘油三酯等脂类物质的合成；增加负责脂肪酸氧化的PPAR-α的表达,加速脂肪酸进入线粒体和微粒体进行氧化,增加脂肪酸的消耗,从而降低肝合成甘油三酯的底物水平,改善和减轻肝细胞脂肪变性。
(2)减少肝脏内源性和外源性FFA的吸收,促进线粒体中脂肪酸的β氧化,减少ROS的产生,提高机体的抗氧化能力,降低脂质过氧化产物的含量,进而抗脂质过氧化损害,保护肝细胞,减轻肝脏脂肪变性和组织损伤。
(3)抑制细胞因子的过度产生,抑制炎症的瀑布效应,改善和减轻肝细胞变性和肝组织炎症。