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目的探讨TGFβ1-Smad信号转导通路中TGFβ1与Smad4基因对胆管癌细胞Snail基因、Slug基因、上皮细胞钙粘蛋白(E-Cadherin)以及波形蛋白(Vimentin)表达的影响,从而界定TGFβ1与Smad4基因对胆管癌EMT的作用,为胆管癌的药物治疗提供相关理论依据。方法(1)预实验：①采用Western Blot方法验证Smad4、E-Cadherin和Vimentin在胆管癌细胞RBE中的内源表达及相应抗体的有效性；②考查plvt7慢病毒感染RBE细胞后的感染效率,筛选感染效率能够达到80%以上的最低病毒量作为下一步的实验条件。(2) Smad4基因干扰载体的构建：针对人Smad4基因设计并合成特异性干扰片段,并将其连接入干扰载体pMagic7.1中,经大肠杆菌DH5a感受态细胞转化后提取质粒,经鉴定后经293T细胞进行慢病毒干扰载体的包装,同时构建空载体作为阴性对照,并将其感染胆管癌细胞RBE,检测其干扰效果,以确定下一步实验。(3)实验分组及目的基因和蛋白的检测：将实验组分为6组：RBE细胞组、RNA干扰细胞组、NC对照组、RBE细胞+TGFβ1处理组、RNA干扰+TGFβ1处理组、NC对照组+TGFβ1处理组,进行细胞培养,采用Western Blot和Real time PCR方法分别检测经药物处理24h和48h时各组Smad4、Snail、Slug、E-Cadherin和Vimentin的表达差异。结果(1)人胆管癌细胞RBE中Smad4基因的表达下调后,Snail和Slug基因的表达上调(p<0.05),而E-Cadherin和Vimentin的表达下调(p<0.05)。(2) TGFβ1在细胞培养液的浓度增加后,人胆管癌细胞RBE中Smad4、Slug以及Vimentin的表达上调(p<0.05),E-Cadherin的表达下调(p<0.05),而Snail基因的表达无明显差异(p>0.05)。(3)人胆管癌细胞RBE中Smad4基因表达下调的同时增加TGFβ1在细胞培养液中的浓度,Snail、Slug基因的表达上调(p<0.05),E-Cadherin的表达下调(p<0.05),处理24h时Vimentin的表达下调(p<0.05),处理48h时Vimentin的表达上调(p<0.05)。结论TGFβ1可通过TGFP信号转导通路对胆管癌细胞EMT的发生发挥重要作用,而Smad4参与的信号转导通道无法独自完成胆管癌EMT的诱导,需与其它信号通道共同诱导胆管癌EMT的发生,以此可说明通过对TGFβ1和Smad4的调控可干预胆管癌EMT的发生机制。