【摘 要】
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基因工程抗体具有广阔的应用前景，但其临床用药量相当大，如治疗B细胞淋巴瘤的抗CD20抗体(Rituxan)，一个疗程用药量约为1.2 g；应用于乳腺癌的抗HER2抗体(Herceptin)，一个疗程用药量
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 解放军军事医学科学院
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基因工程抗体具有广阔的应用前景，但其临床用药量相当大，如治疗B细胞淋巴瘤的抗CD20抗体(Rituxan)，一个疗程用药量约为1.2 g；应用于乳腺癌的抗HER2抗体(Herceptin)，一个疗程用药量约为0.88 g。而目前制约抗体大规模应用的最大障碍是抗体的产量。本课题旨在探索提高抗体基因表达的策略，主要工作及结果如下： 一、含突变neo基因的高效表达载体的构建及热点整合 1、通过PCR方法对新霉素磷酸转移酶(neo)基因进行点突变，构建成含Anti-Her2-scFv-Fc-IL-2融合蛋白和突变neo基因(mneo)双顺反子表达载体，实现了融合蛋白和neo基因在CHO细胞中的共表达。 2、含有mneo基因的转染细胞G418抗性显著降低，而融合蛋白表达水平明显高于含野生型neo细胞的高表达克隆，表达量约达3μg／ml，且细胞生长状态和目的蛋白表达水平均十分稳定，表明目的基因已经稳定地整合于宿主细胞染色体热点位置。此设计方案不仅大大提高了外源基因的表达量，且极大地降低了筛选阳性克隆的劳动强度。 二、建立鼠抗体转录调控序列网页数据库 1、通过调研大量文献和序列相关数据库对鼠抗体基因表达调控元件及相关信息进行收集、分类、分析，用网页制作和作图工具制作成关于鼠抗体基因表达调控元件网页数据库。 2、通过该数据库，能够查看与鼠抗体基因转录密切相关的调控元件及与之结合的反式作用因子，并能了解它们对抗体基因的转录所发挥的正向或负向调控作用。对于重要的调控元件及反式作用因子给出了解释及参考文献，若要了解其详细功中文摘要能可以通过与因特网的链接功能进一步进行查询。该数据库的建立，为分析抗体基因序列中具有重要正向调控功能的核心序列及与之相互作用的反式作用因子，及有效利用这些元件构建新型高效真核表达载体奠定了基础。
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