论文部分内容阅读
目的:通过观察猪的碎块软骨组织和整块软骨组织在体外培养过程中不同时间点TGF-β1的表达程度、软骨细胞在组织边缘聚集情况以及Ⅱ型胶原的合成量,分析二者间差异。为进一步研究关节软骨愈合机制提供实验依据。方法:从10只6月龄猪膝关节股骨滑车部获取80个全层关节软骨块(1×1cm2),随机分为2组,每组40个标本。实验组:将软骨块进行碎块化处理(1×1×1mm3),植入琼脂糖凝胶中进行体外培养。对照组:将软骨整块植入琼脂糖凝胶中进行体外培养。分别于培养的第0、1、2、3周每组随机取10个标本,通过HE染色观察对软骨细胞在软骨组织边缘聚集情况进行组织半定量评分,通过观察TGF-β1免疫组化片中阳性细胞百分数以及Ⅱ型胶原免疫组化片平均灰度值评价TGF-β1与Collagen Ⅱ表达程度。实验数据采用SPSS19.0软件分析,组织半定量评分较采用秩和Mann-Whitney U检验,TGF-β1阳性细胞百分数、Ⅱ型胶原免疫组化片平均灰度值采用独立样本t检验,Spearman相关性分析法分析TGF-β1阳性细胞百分数与组织半定量评分分值之间相关性,Pearson相关分析法分析TGF-β1阳性细胞百分数和Ⅱ型胶原免疫组化片平均灰度值之间相关性。结果:1.TGF-β1阳性细胞百分数:同一培养时间,实验组TGF-β1阳性细胞百分数均高于对照组,培养的第0周无统计学意义(P>0.05),第1、2、3周均有统计学意义,各组阳性细胞百分数随培养时间增高,经组内不同培养时间两两对比,实验组在培养的第2周与第3周时对比无统计学意义(P>0.05),其他组内不同培养时间对比均有统计学意义(P<0.05),对照组在培养的第2周与第3周时对比无统计学意义(P>0.05),其他组内不同培养时间对比均有统计学意义(P<0.05)。2.HE染色组织半定量评分:同一培养时间,实验组分值均高于对照组,培养的第1周与第2周有统计学意义(P<0.05),第3周无统计学意义(P>0.05);各组分值随培养时增加,经组内不同培养时间两两对比,实验组组织半定量得分在培养的第1、2、3周对比第0周有统计学意义(P<0.05),其他组内不同培养时间对比无统计学意义(P>0.05),对照组在第培养的第3周与第0、1周对比具有统计学意义(P<0.05),其他组内不同培养时间对比无统计学意义(P>0.05)。3.Ⅱ型胶原免疫组化片平均灰度值:实验组平均灰度值在培养的第0周大于对照组,(P>0.05),在1、2、3周时均小于对照组(P<0.05),各组平均灰度值随培养时间减小,经组内不同培养时间两两对比,实验组与对照组所有组内不同培养时间对比均有统计学意义(P<0.05)。4.TGF-β1阳性细胞百分数与组织半定量评分分值相关性:TGF-β1阳性细胞百分数与组织半定量评分分值呈正相关,(r=0.454,P<0.05),具有统计学意义。5.TGF-β1阳性细胞百分数和Ⅱ型胶原免疫组化片平均灰度值之间相关性:TGF-β1阳性细胞百分数与Ⅱ型胶原免疫组化片平均灰度值呈负相关,r=-0.731,P<0.05,具有统计学意义。结论:猪关节软骨经碎块化处理后,组织中TGF-β1的表达增强,TGF-β1通过促进软骨细胞的迁移以及Ⅱ型胶原的合成增强了碎块软骨组织的修复能力。