电针对实验性干眼症泪腺和结膜上皮细胞凋亡的调节作用及其机制研究

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目的:  观察电针对干眼症兔泪液分泌、泪膜稳定性及眼表损伤的干预作用,探讨电针对干眼症兔泪腺和结膜上皮细胞凋亡及凋亡相关蛋白Caspase-3、Fas、Bcl-2表达的影响,从细胞凋亡角度探讨电针治疗干眼症的作用机制。  方法:  雄性健康新西兰大白兔24只,随机将其分为正常组、模型组、电针组和假电针组,每组各分6只大白兔。采用0.1%苯扎氯铵滴眼制作兔干眼症模型;模型制备成功后,进行干预治疗。正常组和模型组均不进行任何治疗;电针组取穴攒竹、太阳、丝竹空和风池穴,其中攒竹穴和太阳穴接韩氏电针仪,采用连续波,频率2Hz,留针20min,1次/天,共治疗7d;假电针组,取穴同电针组,穴位进针透皮即止,不通电,留针20min,1次/天,共治疗7d。治疗结束后,观察泪液分泌量、泪膜破裂时间和角膜荧光素染色的情况;采用HE染色光镜下观察泪腺和结膜组织病理学变化;应用TUNEL法检测泪腺和结膜上皮细胞凋亡;采用免疫组化检测泪腺和结膜上皮细胞Caspase-3、Fas、Bcl-2的蛋白表达。  结果:  1、泪液分泌量:与正常组比较,模型组、假电针组的泪液分泌量明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.01);与模型组比较,电针组的泪液分泌量明显增多,差异有统计学意义(P<0.01)。与假电针组比较,电针组的泪液分泌量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。  2、泪膜破裂时间:与正常组比较,模型组、假电针组泪膜破裂时间均明显缩短,差异均有统计学意义(均P<0.01);与模型组比较,电针组的泪膜破裂时间明显延长,差异有统计学意义(P<0.01);与假电针组比较,电针组泪膜破裂时间明显延长,差异有统计学意义(P<0.05)。  3、角膜荧光素染色:与正常组比较,模型组角膜荧光素染色明显增多,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,电针组角膜荧光素染色明显减少,差异有统计学意义(P<0.01);与假电针组比较,电针组角膜荧光素染色明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。  4、泪腺和结膜组织病理学观察:泪腺和结膜组织在HE染色后观察,结果显示与模型组比较,电针组干眼症兔的结膜和泪腺组织病理损伤均有一定程度的改善。  5、泪腺和结膜上皮细胞凋亡的检测:与正常组比较,模型组泪腺和结膜上皮细胞凋亡率均显著增加(均p<0.01);与模型组相比,电针组泪腺和结膜上皮细胞凋亡率均显著下降(均p<0.01)。  6、泪腺和结膜上皮细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Fas、Bcl-2的表达:与正常组比较,模型组泪腺和结膜上皮细胞Fas、Caspase-3阳性表达积分光密度都显著增加(均p<0.01),Bcl-2阳性表达积分光密度显著降低(p<0.01);与模型组比较,电针组泪腺和结膜上皮细胞Fas、Caspase-3阳性表达积分光密度都显著下降(均p<0.01),Bcl-2阳性表达积分光密度显著增加(p<0.01)。  结论:  1、电针能提高实验性干眼症兔泪液分泌量,增加泪膜破裂时间,促进兔泪腺和结膜组织损伤的修复。  2、电针能抑制实验性干眼症兔泪腺和结膜上皮细胞的凋亡。  3、电针能下调实验性干眼症兔泪腺和结膜上皮细胞Caspase-3、Fas蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白的表达,该作用可能是其抑制泪腺和结膜上皮细胞凋亡、进而改善干眼症的重要机制。
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