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目的:构建含有ASPP2基因片段和灭瘟素抗性基因片段的plox PNT真核基因表达载体，制作真核基因敲除质粒，为构建ASPP2基因敲除小鼠模型，研究动物模型体内ASPP2基因功能作准备。
方法:从正常人血细胞中提取人类基因组DNA，根据NCBI中公布的p53BP2(即ASPP2)基因片段设计ASPP25arm和3arm基因片段的PCR扩增引物，两个片段之间包含ASPP2的功能结构域：大量谷氨基重复区(ankyrinrepeat)，SH3结构区(SH3 domain)，丰富的锚蛋白结构区(proline-rich domain)的编码基因片段。根据pcDNA6.2中公布的灭瘟素抗性基因(Blast)序列设计PCR扩增引物，并进行扩增。plox PNT为包含新霉素抗性基因的真核表达载体，利用内切酶SalⅠ、XbaⅠ、NcoⅠ、XholⅠ、BamHⅠ、BglⅡ的酶切技术，对ASPP2片段、Blast片段、plox PNT质粒进行酶切后，再利用T4 DNA连接酶对其进行连接后，去除新霉素抗性基因，由灭瘟素抗性基因Blast片段取代，在ploxPNT载体质粒中插入ASPP25arm和3arm片段，转化提取质粒，进行DNA序列测序鉴定，将测序鉴定正确的质粒转染结肠癌p53+/+细胞，利用灭瘟素筛选细胞单克隆，提取细胞DNA，扩增Blast基因片段，鉴定构建质粒在转染细胞后能否与细胞中DNA融合，达到基因敲除的目的。
结果:扩增了正确的ASPP2基因片段，Blast基因片段，构建了新的具有ASPP2基因敲除和灭瘟素抗性筛选基因的plox PNT真核表达载体质粒，并在转染细胞后通过单克隆筛选实验验证了构建的质粒在转染细胞后能与细胞中DNA发生融合，而发挥基因敲除的作用。
结论:通过一系列PCR扩增、酶切、T4 DNA酶连接、转染细胞试验，成功构建了带有ASPP2基因片段的灭瘟素抗性基因真核表达载体，为构建ASPP2基因敲除小鼠模型奠定了基础。