论文部分内容阅读
本研究以毛桃和其矮化变异后代豫矮砧1号不同生长时期的叶片为材料,运用蛋白质组学技术对豫矮砧1号的矮化机理进行研究,为阐明其矮化分子机理提供重要线索和依据。主要研究结果如下:1、利用改进的O’Farrell双向电泳体系探索适用于桃树叶片蛋白质的双向电泳方法。通过比较两种蛋白裂解液提取蛋白的效果,改进双向电泳参数,比较不同的蛋白上样量,成功建立了桃叶片蛋白质双向电泳技术,其样品制备质量好、蛋白质斑点清晰、重复性高,完全适合进一步的蛋白质组学研究。2、应用建立的桃叶片蛋白质双向电泳技术对豫矮砧1号和毛桃4个不同生长时期的叶片蛋白进行了分离,得到了两种材料重复性较高的2-DE图谱,并利用Image Master 2D软件对图谱进行分析,结果发现:①在豫矮砧1号4月、6月、8月、9月叶片2-DE图谱上分别检测到781、638、621、516个蛋白点,在毛桃4月、6月、8月、9月材料2-DE图谱上分别检测到763、640、618、524个蛋白点,大多数蛋白点分布在分子量（Mr） 12～72KDa,等电点（pI） 4～7之间。②通过对两种材料不同时期2-DE凝胶中的蛋白点进行散点图分析发现,两种材料8月、9月2-DE图谱间的蛋白点相关系数较高,而4月、6月2-DE图谱间的蛋白点相关系数相对较低。③经Image Master软件分析,在豫矮砧1号和毛桃4个不同生长时期的2-DE图谱中检测出22个差异蛋白点,其中15个蛋白点在豫矮砧1号中特异表达,4个蛋白点在毛桃中特异表达,3个蛋白点的表达时期或表达量在两种材料间存在明显差异。3、从2-DE凝胶中切取20个差异蛋白,经胰蛋白酶胶内酶切,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱（MALDI-TOF/TOF-MS ）进行肽序列分析,获得了这些蛋白点的一级质谱（MS）和二级质谱（MS/MS）数据后,通过MASCOT搜库软件检索NCBInr（2008年11月）蛋白质数据库,共有18个蛋白点得到鉴定,分别对应于以下13种蛋白质:At1g17880/F2H1510、高分子量热激蛋白、1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶大亚基、光系统Ⅱ放氧增强蛋白2、真核细胞起始因子iso4E、β-7微管蛋白、核小体组装蛋白1类蛋白3、果糖二磷酸醛缩酶、At3g04620、光系统II反应中心PsbP家族蛋白、蛋白酶体β亚基前体6、甘氨酸脱氢酶（脱羧）、多酚氧化酶前体。这些蛋白质参与光合作用、胁迫响应、能量及氨基酸代谢、细胞周期调控及生长调节等一系列生化过程。并对这些蛋白质在豫矮砧1号生长发育过程中所起的作用以及今后应继续开展的工作进行了讨论。